Ross Geller

TATGCCCTAGGCTCGAGAGCTAGCAGACGTCTTT- 5’ 5’ ATACGGGATCCGAGCTCTCGATCGTCTGCAGAAATTCC 3’ En rose, séquence obtenue après élongation Exercice 3 L'ADN d’un cosmide recombinant* de 48,6 kpb a été hydrolysé par l'enzyme de restriction Sal I. Cet ADN est analysé par électrophorèse sur gel d’agarose (pistes 2 et 4). Un marqueur de taille (l'ADN du phage lambda hydrolysé par l'enzyme de restriction Hind III ) est déposé dans les puits 1 et 3. Ce marqueur de taille est un mélange équimolaire de fragments d’ADN de tailles connues. La quantité

Compte rendu TP n°3 Séparation des protéines par Electrophorèse en gel de Polyacrylamide M. SAINT PAUL But : L'électrophorèse a pour but de séparer des molécules chargées au travers d'un gel (un polymère) sous l'effet d'un champ électrique. Dans ce cas-ci, il s'agira de séparer les protéines d'échantillons et de déterminer le poids moléculaire de ces différentes protéines. Principe : Le gel Le gel est constitué d'un mélange d'acrylamide et de bis-acrylamide (produits

poids moléculaires (PM) théorique et expérimental, le % d’erreur obtenu est de 0.75%, en revers l’albumine est la protéine avec la migration la moins précise puisque le % d’erreur obtenu est de 13.2%. INTRODUCTION L’électrophorèse de protéines en gel de polyacrylamide communément appelée SDS-PAGE est sans doute une des techniques plus amplement utilisées pour caractériser des mélanges complexes de protéines, la méthode est rapide et nécessite de faibles quantités de protéine. SDS-PAGE est un type

ici à estimer la taille des protéines présentes dans l'échantillon. Nous avons tout d'abord dénaturés notre échantillon (mélange avec du solmix et chauffage de l'échantillon) Puis on a déposé sur un gel polyacrylamide, notre échantillon dénaturé. L'électrophorèse a été effectuée. La coloration du gel a par la suite été effectuée avec du bleu de coomassie. Résultat : voir annexe 3 : tableau et graph log(PM)=f(Rf) Poids moléculaire de la protéine de l'échantillon A : D'après les profils de

Le rapport de stage en BTS BIOAC Quelques conseils pour la rédaction • Conseils généraux : • Un rapport de stage doit représenter une trentaine de pages environ, hors annexe(s), en police Times New Roman, taille 12, pour le texte principal. On peut néanmoins utiliser d’autres polices en respectant ce « volume ». • Toutes les pages doivent être numérotées. • Il faut veiller à faire une bonne pagination et varier les mises en formes (taille de police, gras, italique, souligné, voire les couleur(s))

confirme un résultat obtenu en sérologie de routine, on utilise parfois un test dit Western blot (WB), qui est une modification du principe ElIsa énoncé plus haut. dans le test WB, les protéines d’un lysat viral sont séparées en électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PagE), ensuite transférées (« blotting ») vers une feuille de nitrocellulose ou de nylon. cette feuille, découpée en lanières, permettra de tester les sérums pour rechercher les anticorps contre les différentes protéines avec une

vont être sélectivement retenus sur la colonne, tandis que les autres composants sont très rapidement élués. Un changement de la phase mobile (pH, force ionique…) permet ensuite d’éluer les substances d’intérêts. 1°) Purification partielle sur gel de bleu Cibacron de la LDH contenue dans un extrait tissulaire Fraction non retenue Fraction de lavage Fraction E1 Fraction E2 Fraction E3 2°) Mesure de l’activité enzymatique de la LDH dans les différentes fractions

notre cas, la migration a été réalisée sur gel de polyacrylamide. Ce gel est une structure semi-solide issue de la polymérisation entre de l’acrylamide et du bis-acrylamide, qui forment un réseau. Il est composé de deux gels : Un gel de concentration : les dépôts seront tout d’abord en contact avec ce gel, qui a pour but de concentrer les échantillons en une bande fine avant d’arriver au second gel, afin d’éviter un décalage de migration. Un gel de résolution : il a cette fois un rôle de

été isolée sur milieu gélosé additionné de Tétracycline et d’Ampicilline. De ce milieu, les cellules d’E.coli ayant intégré le plasmide recombinant ont été sélectionnées par vérification de la présence de ce plasmide à l’aide d’une électrophorèse sur gel d’agarose (Cf. Image 1). Les pistes des colonies n° 1, 2 et 4 montrent la présence du plasmide par un spot de migration. Elles seront donc utilisées pour la surproduction de l’AAL et ensuite sa purification. II Surproduction de l’AAL et obtention

purification à l’aide d’une électrophorèse sur gel de polyacrylamide. Puis afin d’identifier précisément l’enzyme nous effectuerons un électro-transfert suivi d’une immunorévélation. II) Principe A°) Electrophorèse L’électrophorèse est une méthode d’analyse et de séparation basée sur la migration différentielle de particules chargées sous l’influence d’un champ électrique continu. La migration se fait au sein d’une phase liquide imprégnant un solide poreux ou un gel. Ainsi, les molécules chargées positivement