Absorbance Et Concentration

mthode 2.2.1. Gamme de solutions talon A partir de la solution talon fille F raliser une gamme de solutions talon de concentration allant de 0 50 mg/L, sous un volume final de 5 mL . 2.2.2.Coloration Pour chaque solution talon procder de la faon suivante volumesSol. talon 1, 00 mL NaOH 0,2 mol/L5 mLRactif de Folin Ciocalteu au 1/2 (mL) 0,5 mL Mlanger. Attendre 5 minutes. Lire les absorbances 750 nm contre le tmoin . 2.3. Dosage de la tyrosine dans la solution T Prvoir une dilution de la solution T et

de KM ainsi que du kcat. II) Principe Pour déterminer ces différents paramètres, nous allons faire deux expériences distinctes incluant un dosage spectrophotométrique : dans la première, nous allons faire varier la concentration en enzyme et, dans la seconde, la concentration en substrat. * Action de la trypsine Pour comprendre le principe de ce TP, il est tout d’abord nécessaire d’appréhender son fonctionnement. C’est une enzyme qui contribue à la digestion des protéines alimentaires

choisies par l’opérateur. Schéma : La loi que nous utiliserons afin de caractériser les relations entre les différents facteurs jouant dans l'absorption de la lumière est celle de Beer Lambert. Cette loi établit une proportionnalité entre la concentration d'une entité chimique en solution, l'absorbance de celle-ci et la longueur du trajet parcouru par la lumière dans la solution. VALIDITE DE LA LOI Seulement cette loi entraine de nombreuse contrainte que nous devons respecter, nous allons

métaux). Les appareils correspondants fonctionnent pour la plupart suivant l’une ou l’autre de ces méthodes, bien que le principe des mesures soit différent. Les applications sont très nombreuses étant donné qu’on atteint pour certains éléments des concentrations inférieures au µg/L (ppb). 1.1 ILLUSTRATION ET INTERPRETATION DES PHENOMENES CONCERNES EXPERIENCE DE KIRCHHOFF Vieilles de plus d’un siècle les expériences de Kirchhoff, à qui l’on doit également l’invention du spectroscope, permettent d’illustrer

Introduction 2 I. Formation d’un gradient continu de saccharose 3 II. Gradient discontinu 8 III. Détermination de la masse molaire d’une molécule 14 IV. Influence du temps de centrifugation sur la formation d'un gradient. 21 V. Influence de la concentration de percoll sur les gradients. 26 Conclusion 30 Bilan : Très bon rapport. Il manque quand même quelques informations. La partie sur la BSA restant la plus fragile. Bilan : Très bon rapport. Il manque quand même quelques informations

ajouter de l'écarine, du tampon d'activité et du substrat chromogénique. On mesure ensuite directement l'activité grâce à un spectrophotomètre. Le spectrophotomètre est un appareil permettant des mesures rapides et sensibles de composés de concentration variable. Cet appareil mesure la densité optique. Les mesures peuvent se faire soit pour une longueur d'onde définie soit au cours d'une période spécifique. Résultats: Précipitation au Chlorure de Baryum: Sur ce graphique, on peut voir

au 3,5-DNS – Boucher les tubes et les porter au bain-marie à 100°C pendant 5 min exactement. – Refroidir sous un courant d'eau froide (ou dans un bain d'eau froide). – Ajouter 15 mL d'eau distillée. – Mesurer les absorbances à 530 nm contre un blanc. 2.2.Préparation de la gamme d'étalonnage : – Préparer par pesée 100 mL de solution étalon de lactose monohydraté à 2 g/L. – Préparer une gamme d'étalonnage de 6 tubes contenant de 0 à 2 mg de lactose

solutions étalon: A partir de la solution étalon fille F réaliser une gamme de solutions étalon de concentration allant de 0 à 50 mg/L, sous un volume final de 5 mL . 2.2.2.Coloration: Pour chaque solution étalon procéder de la façon suivante: volumes Sol. étalon 1, 00 mL NaOH 0,2 mol/L 5 mL Réactif de Folin Ciocalteu au 1/2 (mL) 0,5 mL Mélanger. Attendre 5 minutes. Lire les absorbances à 750 nm contre le témoin . 2.3. Dosage de la tyrosine dans la solution T : Prévoir une dilution

acide, notée Hln, esl jaune et dont la forme basique,notée ln-, estbleue. mère. de Préparation la solution On prépare,dans une fiole jaugée,deux litresd'une solutionmère So de bleu de mol.L-l. Co môtaire solutéapporté = 3,0 10-5 en de bromophénol concentration Premièrepartie : Étude de la solution mère 56 un On considère volumeV = 100mL de solution dont le pH est de 4,7. introduite no la 1. Calculer quantitéde matièrede bleu de bromophénol initialement S d a n s1 0 0m L d e s o l u t i o n o . 2. L'espêceHln

résultats théoriques : µg de BSA / 200µL Concentration 0 5 10 20 30 50 60 75 100 200 Do à 650 nm 0,243 0,251 0,251 0,271 0,278 0,304 0,320 0,340 0,372 0,463 Do à 650 nm 0,240 0,245 0,253 0,276 0,279 0,310 0,325 0,344 0,377 0,469 Moyenne Do à 650 nm 0,2415 0,248 0,252 0,2735 0,2785 0,307 0,3225 0,342 0,3745 0,466 Graphique des variations de la Densité Optique à 650 nm en fonction de la Concentration en protéines en µg de BSA / 200µL : Absorbances obtenues pour les échantillons inconnus