Absorbance

CRÉATION DE GRAPHIQUES AVEC EXCEL Première partie - Spectre d'absorbance Les données du Tableau I ci-dessous sont utilisées pour déterminer le spectre d'absorbance du bleu de bromophénol. Tableau I. Absorbance du bleu de bromophénol à différentes longueurs d'onde. Longueur d'onde (nm) Absorbance 450 0,107 ± 0,001 470 0,113 ± 0,001 490 0,141 ± 0,001 510 0,209 ± 0,001 530 0,360 ± 0,001 550 0,506 ± 0,001 570 1,800 ± 0,001 590 1,950 ± 0,001 610 0,584 ± 0,001 630 0,115 ± 0,001 *** À tout moment, utilisez

sous forme d’activités expérimentales par l’élève. L’activité 1 Fabrication de matières colorées répond à la compétence : « Pratiquer une démarche expérimentale mettant en œuvre une extraction, une synthèse, une chromatographie » ; l’activité 2 Absorbance d’une solution introduit les techniques de spectrophotométrie et travaille la compétence « Interpréter la couleur d’un mélange obtenu à partir de matières 32 LIVRE DU PROFESSEUR 5908_LDP_Chap04.indd 1 13/09/11 15:48:13 colorées

0,2 0 Homogénéiser, boucher les tubes avec du papier aluminium et porter 5 min exactement au bain marie bouillant. Laisser refroidir Ajouter : Eau distillée (ml) 6 Homogénéiser et laisser reposer 10 minutes à température ambiante. Lire les absorbances (DO) à 540 nm contre le témoin (tube 0). Résultats : - Tracer la courbe d'étalonnage DO = f (nombre de moles de sucre inverti en µM/tube). - Déterminer l'équation de cette droite d'étalonnage (faites vos calculs sur Excel 2003) Remarque : vous utliserez

sous forme d’activités expérimentales par l’élève. L’activité 1 Fabrication de matières colorées répond à la compétence : « Pratiquer une démarche expérimentale mettant en œuvre une extraction, une synthèse, une chromatographie » ; l’activité 2 Absorbance d’une solution introduit les techniques de spectrophotométrie et travaille la compétence « Interpréter la couleur d’un mélange obtenu à partir de matières 32 LIVRE DU PROFESSEUR 5908_LDP_Chap04.indd 1 13/09/11 15:48:13 colorées

cellules mortes relargue le rouge. Lors du rinçage le rouge relargué est éliminé. Pour récupérer le rouge contenu dans les cellules vivantes on ajoute une solution acide qui lyse (détruit) les cellules. Le rouge des cellules vivantes est dosé par absorbance au spectrophotomètre. Dans les expériences il y a toujours un témoin positif et un témoin négatif. Le témoin positif dans le cas de la méthode au rouge neutre est une solution de SDS (sodium dodécyl sulfate) encore appelée lauryl sulfate de sodium

effectue le même calcul pour les autres tubes et on obtient la tableau de la figure 1. 3. Utilisation du spectrophotomètre On a préparé deux autres tubes ( 6 et 7) et mesurer leur absorbance: le tube 6 contenant la solution mère d'hydrolysat de caséine et le tube 7 la même solution mais dilué de moitié. Les absorbances sont notées dans le tableau de la figure 2. Figure 3 : courbe d'étalonnage On fait une courbe d'étalonnage (figure 3) nous permettant de connaître les concentrations massiques

proche du maximum d’absorbance pour le colorant jaune, et pour laquelle l’absorbance du colorant bleu soit nulle. La longueur d’onde λ1 = 450 nm vérifie ces deux conditions contrairement à la longueur d’onde λ = 420 nm (absorbance du bleu patenté non nulle). 2.2.2. absorbance A 1, 2 1, 1 1,0 Sirop de menthe dilué dix fois Ableu = 1,06 Ajaune = 0,82 0, 9 0, 8 0, 7 0, 6 0, 5 0, 4 0, 3 0, 2 0, 1 0 360 400 440 480 520 560 600 640 680 720 λ1 = 450 nm λ2 = 640 nm longueur d'onde

solution à deux longueurs d'onde : 500nm et 450 nm ? Exercice 5 : Une solution d’un indicateur colorée de concentration C=1.10-5 mol/L présente une absorbance de 0,02 dans une cuve de trajet optique de 1 cm. 1- Quel est le coefficient d'absorption molaire e de cet indicateur? Quel est son unité ? Sachant qu'il n'est pas possible de mesurer des absorbances supérieures à 2, quelle est la concentration maximale que l'on puisse mesurer ? Commenter cette valeur. 2) Sachant que les dérivés du phénol sont

solution B1, puisque son absorbance sera moins élevée que celle de la solution B. De plus, la concentration de la solution B1 va être plus élevée que toutes les autres solutions étalons préparées puisque celle-ci ne se retrouvera pas dans la courbe d’étalonnage et il va ainsi falloir procéder à une dilution.[il faut une source selon le guide de rapport Tableaux des mesures : Tableau 1 : Valeurs pour préparer la courbe d’étalonnage Solutions étalons No. Cdil Vconc Absorbance ( max = 592 ) x mol/L

longueur de la cuve(cm) c : la concentration du soluté(mol.L-1) ε : le coefficient d’extinction molaire du soluté(???) 2 Mesures d’absorbance Les absorbances s’ajoutent : le spectrophotomètre mesure l’absorbance de la cuve, du solvant et de toutes les substances dissoutes Il faut tout d’abord « faire le blanc » : mesure qui va fixer le ZERO des absorbances • On travaille si possible avec la radiation correspondant au maximum d’absorbance: KMnO4 Utilisation de la loi de Beer Lambert A=ε.l.c Si l’on