Absorbance

expérimentaux obtenus sont en accord avec cette loi. Afin de déterminer la concentration de la bouillie bordelaise préparée par le jardinier, on dilue 20 fois la solution S avant de l’analyser avec le spectrophotomètre. On mesure une absorbance A’ = 0,120 pour la solution diluée S’. 5. Détailler le protocole expérimental de préparation des 100 mL de la solution S’. La verrerie mise à disposition est :· fiole jaugée : 100 mL et 200 mL· pipettes jaugées :

on note S la solution aqueuse obtenue à l’issue de cette dilution. Les résultats sont consignés dans le tableau ci-dessous : Solution Si S0 S1 S2 S3 S4 S5 S Concentration en quantité de matière C (en µmol.L-1) 10 5,0 2,5 2,0 1,5 1,0 …… Absorbance A 1,6 0,80 0,39 0,32 0,24 0,16 0,75 Les mesures sont reportées sur le graphe ci-dessous représentant l’évolution de l’absorbance A de la solution aqueuse de bleu patenté en fonction de la concentration C en quantité de matière de bleu patenté

spectrophotomètres en salle de TP. La situation 2 peut être étudiée en classe entière. Si elle est traitée en TP, cette expérience collective doit être démarrée dès le début de la séance. Objectifs Montrer qu’un spectrophotomètre donne une réponse en absorbance linéaire avec la concentration d’une espèce colorée. L’appliquer éventuellement à la détermination de la concentration d’une solution officinale de “ teinture d’iode ”. Utiliser cette propriété pour le suivi temporel de la réaction d’oxydation

partage ; trip : tri-peptide ; VAL : valine ; GLU : glutamate ; HIS : histidine ; LEU : leucine ; PRO : proline ; ALA : alanine ; FC : Folin Ciocalteu ; chm : chromatogramme ; prot : protéine ; cent : centrigugation ; SP : spectrophotométrie ; abs : absorbance ; concentration molaire ; MM : masse molaire ; rf : rapport frontal ; cell : cellulose ; BL : Beer-Lambert ; phm : phase mobile ; phs : phase stationnaire ; po : polaire ; apo : apolaire ; cbe : courbe d’étalonnage ; gme : gamme d’étalonnage. Résumé :

La quantité de protéines dans les essais est donc déterminée à partir d’une gamme étalon d’une solution d’albumine à 0.1 mg/mL. |Tube |Vprise d’essai |Veau (µL) |Vréactif Bradford |Quantité d’albumine|Absorbance lue |Absorbance corrigée| | |(µL) | |(µL) |(µg) | | | |Blanc |0 |500 |500 |0

gradient de concentration à, 0.5 molaire nous avons pu constater qu’il y avait encore une absorbance significative. Donc nous pouvons penser que la protéine se situe dans ces deux premières fractions récupérées lors de la chromatographie échangeuse d’ions. (la fraction contenant la protéine est notée d’une étoile). Ensuite nous avons faire un test enzymatique sur les deux fractions qui possèdent les absorbances les plus importantes. Le graphique obtenu d’après le test enzymatique nous que sur les trois

cm3 20 cm3 20 cm3 4 cm3 4 cm3 4 cm3 4 cm3 4 cm3 Q. S. P. 50 cm3 Agiter, laisser réagir au moins 15 minutes avant d’effectuer les mesures. 3.2. Tracé de la courbe d’étalonnage Fixer la longueur d’onde à λ = 510 nm. Relever les valeurs des absorbances A (ou densités optiques D.0.) pour chacune des solutions préparées. Remplir le tableau de mesures. Tracer la courbe A (ou DO.) = f (ρn). ρn = concentration en g de Fe par litre d’une solution “fille” obtenue avec n cm3 de solution étalon.

chaque solution : -à la longueur d’onde λ1 = 450 nm pour le colorant E102 Numéro de la solution Concentration (mg.L-1) Absorbance A 1 2 3 4 5 6 5 10 12,5 15 20 25 0,26 0,41 0,5 0,61 0,83 1,00 -à la longueur d’onde λ2 = 630 nm pour le colorant E131 Numéro de la solution Concentration (mg.L-1) Absorbance A 1 2 3 4 5 6 2,0 4,0 5,0 6,0 8,0 10,0 0,38 0,58 0,74 0,88 1,08 1,41 3

l’absorbance dans la cuve 2 D’après la courbe d’évolution de l’absorbance au niveau de la cuve 2, qui contient du cyanure, on remarque une augmentation de l’absorbance à 550nm jusqu’à environ 13.5 minutes, puis une stabilisation à 14 minutes pour une absorbance de 0.8. Cela signifie que le cyanure a eu un effet sur les réactions de la chaine respiratoire : il a agi soit au niveau du cytochrome C directement en le bloquant sous sa forme réduite, soit au niveau du complexe IV. La conséquence en est l’augmentation

Tableaux X : densité optique des différentes quantités de l'O-nitrophenol (ONP) # tube | ONP 10 mM (µL) | H2O (µL) | Tp acétate 50 mM pH 4,5 (µL) | Na2CO3 0,2M (mL) | Volume final (ml) | Quantité d'ONP (µmol) | ONP (µM) | Absorbance prévue (420 nm) | Absorbance obtenue | | | | | | | | -Na2CO3 | + Na2CO3 | | | 1, 2 | 0 | 500 | 500 | 2 | 3 | | | | 0,0 | 0 | 3, 4 | 10 | 490 | 500 | 2 | 3 | | | | 0,135 | | 5, 6 | 20 | 480 | 500 | 2 | 3 | | | | 0,4 | | 7, 8