Bromure d'éthidium

subir divers traitements comme l’hydrolyse par une enzyme de restriction, le traitement avec la RNase et la DNase I. Puis chacun de ces traitements sera ensuite déposé puis analysé par électrophorèse sur gel d’agarose. Ils seront révélés par le bromure d’éthidium qui est un colorant et dont la fluorescence augmente en présence d’ADN. Grâce à cette technique, la présence et la taille des acides nucléiques va pouvoir être étudiée, ainsi que la localisation des sites de restriction spécifiques de l’enzyme

•bourgeonnements cellulaires et formation de corps apoptotiques •maintient de l’intégrité mb plasmique •phagocytose des corps apoptotiques •pas de processus inflammatoire PIFO-2004-O.Stettler C A mise en évidence de l’apoptose: marquage au bromure d’ethidium (BET) fragments internucléosomiques terminal deoxynucleotidyl transferase technique « tunnel »: contrôle PIFO-2004-O.Stettler apoptose autre type de mort cellulaire: Nécrose (ex: trauma; processus passif) •gonflement cellulaire

 Chimiques   Ajout  d’un  Groupement  Methyl     Ou  Alkyl  sur  des  Sites  Sensibles   8 Insertion/délétion de bases Peuvent être induit par des agents intercalants Ex. Acridine orange, Bromure d’ethidium -  Sur brin matrice: Induit une insertion - Sur brin néosynthétisé: Induit une délétions Aussi induit par UV, rayons X... Fréquence de mutations Chez un procaryote ou un eucaryote unicellulaire Mutation d’un gène : environ 10-8 L’obtention

se fixant aux acides nucléiques (ADN, ARN) - Certains se fixent sur les paire de base A-T : DAPI et Hoechst - D’autres s’intercalent entre les brins d’ADN ou d’ARN double brin (ça existe):ce sont les intercalant ex : l’iodure de propidium, le bromure d’ethidium. Ceci nous permet de colorer l’ADN dans le noyaux, l’observation de sa densité nous permet de différencier des zones où l’ADN est plus compact (hétérochromatine) que d’autres (euchromatine), il existe aussi une zone non colorée (donc sans ADN)

retrouvent le plus loin du puits de dépôt car leur poids moléculaire est moins important que les ADN ayant un poids moléculaires plus élevé et les forces de glissements sont donc réduites. Pour visualiser les bandes d'ADN sur ce gel on utilise du bromure d'éthidium (BET) qui est un agent d'intercalation couramment utilisé comme marqueur d'acide nucléique dans les laboratoires de biologie moléculaire. Lorsqu'il est exposé à des rayonnements ultraviolets, il devient fluorescent avec une couleur rouge-orangée

acides nucléiques en colorant avec un colorant fluorescent, comme le bromure d'éthidium. Ce composé s'intercale entre les bases empilées et lorsque illuminé avec une source de lumière ultraviolette, il émet dans le spectre visible (orange). Comme la lumière UV est particulièrement dommageable pour la rétine de l'oeil, l'expérimentateur devra porter soit des lunettes de protection, soit une visière. De plus, comme le bromure d'éthidium (BET) est un agent intercalant, il est de nature mutagène et l'on

d'agarose : les molécules de plus petites tailles se déplacent plus rapidement et migreront plus loin que les molécules de tailles supérieure. Donc,à l’issue de la PCR, les produits obtenus sont séparés dans un gel d’agarose contenant du BET ( bromure d’éthidium ) qui est un agent intercalant et devient fluorescent sous lumiere UV. Préparation du gel : 600 mg d’agarose ( polymère à base d’agar purifié ) dissous dans 50 ml de tampon TAE (Le TAE possède le plus faible pouvoir tampon mais produit une meilleure

se réalise dans des salles différentes : préparation de la PCR (tampon, TAQ polymérases, amorces…), ajout de l’ADN préalablement décongelé, centrifugation, électrophorèse sur gel d'agarose (annexe n°3), thermocycleur, bain de BET (Bromure d'éthidium, un intercalant de l’ADN) puis lecture de l l'ADN dans un machine à UV. Pour finir, l'ADN est envoyé dans un centre de séquençage. Les résultats sont restitués au CBGP pour analyse et exploitation des séquences. 6B) La bio-informatique De

|moléculaire | | | | | On fait migrer à 100 V pendant 30 minutes environ. Après migration, nous colorons le gel au BET (bromure d’éthidium qui s’intercale entre les bases de l’ARN à 0,15%). Le BET incorporé à l’ADN émet une fluorescence sous lumière UV. Voici le résultat obtenu sous UV : Nous pouvons voir que notre sonde n’a pas fonctionné. Le T+ a bien marché ; d’autre part

plasmide, 2µL de tampon bleu et 6µL d’eau. Pour charger les produits nous utilisons un pipetman P20. Lors de cette étape il est indispensable d’être protégé correctement (blouse, gants). Aussi il ne faut jamais toucher le gel qui contient du Bromure d’éthidium (BET) toxique. Le BET est utilisé comme un colorant qui se lie à l’ADN et le rend fluorescent sous l’effet des rayons ultra-violets. Lorsque le temps manque, cette étape d’électrophorèse peut être réalisée après l’étape de ligation qui