Bromure d'éthidium

unité d’absorbance correspond à 25 g/ml de RNA ou d’ADN simple brin. Malheureusement, cette méthode est peu sensible pour manipuler des concentrations d'ADN inférieures à 250 ηg/ml c. Dosage de l'ADN par fluorescence en présence de BET Le Bromure d'Ethidium (BET) interagit avec l'ADN en s’y intercalant et une fois intercalé, le rendement de fluorescence du colorant devient cent fois plus important. Le principe de la quantification consiste à comparer à l’ il nu (estimation), ou mieux après photographie

peut pas distinguer entre miR-133a et miR-133b, et la sonde pour miR-1/206 ne peut pas distinguer entre miR-1 et miR-206. miR-16 est un microARN exprimé largement détectée dans la plupart des lignées cellulaires. ARNr 5S a été coloré avec du bromure d'éthidium pour normaliser chargement. ( A ) Petit ARN du Nord sondé pour miR-133 expression dans des lignées cellulaires. La voie marquée "C2C12" contient de l'ARN à partir de cellules en prolifération, alors que "C2C12 Diff" est un ARN à partir de cellules

|Fixation sur les acides nucléiques. |Distinction bactéries mortes (vertes) | | | | |Fluorescence verte (ADN) et orange (ARN) |/ bactéries vivantes (orange) | | |Bromure d’éthidium |Oui |Marque les acides nucléiques (fluorescence|Dénombrement des cellules somatiques | | | | |orange) |du lait. |

26 28 Arsine 58 Azide de sodium (voir Azoture de sodium) Azoture de sodium 60 Benzaldéhyde 62 Benzène 64 Benzidine 66 Benzo(a)pyrène 68 BET (voir Bromure d’éthidium ) Bétamercaptoéthanol (voir 2-mercaptoéthanol) Bichromate de potassium (voir Dichromate de potassium) Bleu trypan 70 Borax 72 Brome 74 Bromure de cyanogène 76 Bromure d’éthidium 78 Bromure d’hydrogène (voir Acide bromhydrique) 1,3-Butadiène 80 1-Butanol 82 Carbonate de sodium 84 Chaux (voir Oxyde de calcium) Chloroforme (voir Trichlorométhane)

6 7 Figure A : Profil de restriction de l'ADN plasmidique P digéré par différentes enzymes de restriction. Après digestion enzymation, les milieux de digestion sont déposés et séparés sur gel d'agarose 1%. Ils sont révélés à l'aide de bromure d'éthidium. Légende : puits 1 et 7 : Marqueurs de taille (voir ci-dessous) puits 2 : ADN P natif puits 3 : ADN P digéré par SmaI puits 4 : ADN P digéré par EcoRI puits 5 : ADN P digéré par EcoRI et SmaI puits 6 : ADN digéré par EcoRI et BamHI Marqueurs

anaérobies et anaérobies facultatives et à Gram négatif ANGP (bactéries) anaérobies et anaérobies facultatives et à Gram positif ARN acide ribonucléique ATP adénosine triphosphate BA bactéries acétiques Brettanomyces bruxellensis B. bruxellensis BET bromure d’éthydium BL bactéries lactiques BT bactéries totales Cl CMI °C ¢ centilitre concentration minimale d’inhibition degré celcius cellule DC densité colorante denaturing gradient gel electrophoresis (électrophorèse en gradient dénaturant)

40 respectivement) ou provoquer l’apparition ou augmenter la fréquence de cancers (produits cancérogènes de Catégories 1, 2 et 3 décrits par les phrases de risques R 45 ou R 49 et R 40 respectivement). Exemples de mutagène : l’acrylamide, le bromure d’éthidium (BET), les agents alkylants (Nméthyl-N-nitroso-urée, sulfate de diméthyle), … Exemples de cancérogènes : les aflatoxines, le benzène, les médicaments, cytostatiques,… Les produits toxiques pour la reproduction (Catégories 1, 2 et 3 décrits par

traitement de 30 min au lysozyme à 10 mg / mL à 37°C. La suspension a été ajustée à 1% de SDS puis les cellules ont été assujetties à 3 cycles de congélation dans l’azote liquide pendant 30 sec suivie d’une décongélation 10 min à 65°C. Un traitement au bromure de cetyl trimethyl ammonium (CTAB) (11,3 g/L) a été effectué pour faciliter l’élimination des protéines et des polysaccharides par deux extractions au chloroforme-alcool isoamylique suivies de deux extractions au phénol-chloroforme (centrifugation

les méthodes d’extraction d’ADN et on en réalisera une. On pourra réaliser la digestion préalable d’un ADN par des enzymes de restriction. On utilisera des marqueurs de taille. On privilégiera la révélation par un colorant plutôt que par le bromure d’éthidium (BET). On réalisera une amplification en chaîne par polymérase. On mettra en évidence l’importance des conditions opératoires. 3. Amplification en chaîne par polymérase (PCR) 54 Module 6 Métabolisme Enseignement théorique La biochimie

connues pour servir de marqueurs de taille. On ajoute dans les dépôts deux colorants : — un bien visible sur le gel qui va migrer très rapidement avant les fragments de DNA pour limiter la distance parcourue au bord de l’anode ; — un autre, le bromure d’éthidium qui se fixe spécifiquement au DNA quelle que soit la séquence et qui émet une fluorescence mauve lorsqu’on l’éclaire avec des rayons ultraviolets. • • • On examine le gel sous lumière ultra-violette à 254 nm et on photographie les fragments