Centre réactionnel

double flèche, indiquant les deux sens dans lesquels s’effectue la réaction : H2O ⇄ H+ + OH- On applique exactement les mêmes règles que précédemment, mais on considère qu’il reste toujours une quantité de réactif ou de produit dans le milieu réactionnel et l’instant final de la réaction correspond à l’équilibre. Partie expérimentale : Le but de manipulation : détermination de la constant d’équilibre chimique

TP : ETUDE EXPERIMENTALE DE LA PHOSPHATASE ALCALINE BUT Nous allons déterminer les paramètres cinétiques d’une enzyme en étudiant l’influence de la concentration en substrat et celle de la présence d’un inhibiteur dans le milieu réactionnel. On va mesurer l’activité de l’enzyme en mesurant par spectrophotométrie l’apparition du produit de la réaction qui sera coloré. PRINCIPE Nous allons utiliser dans ce TP la phosphatase alcaline de veau. C’est une enzyme à 2 substrats qui à un pH optimal

Photocopie expériences Généralisation : Concentration des réactifs et température sont deux facteurs cinétiques. Une transformation chimique se produit plus rapidement quand on augmente : - la concentration des réactifs - la température du milieu réactionnel Intérêt : Quand la t° diminue, la vitesse des réactions aussi. Application : frigo, congélo 4/ Quels outils pour étudier l’évolution temporelle d’une transformation ? x(mol) Le tableau descriptif de la réaction : Il nous donne l’avancement

imaginées: Une transformation en deux temps: Parcours indirect Rupture de la liaison polarisée puis formation de la liaison avec le nucléophile Eie Énergies d’activation Cl A B Énergie libérée avancement réaction Intermédiaire réactionnel Cl LE CARBOCATION Tatibouet Arnaud 23 Approche cinétique de ces possibilités, la réaction concertée : la vitesse de la réaction dépend des concentrations du nucléophile et du substrat V = k [Nu:][R-X] La réaction est dite d’ordre

et congélateur ralentissent les réactions de dégradation biochimique des aliments. •  En chimie, on ralentit fortement certaines réactions en refroidissant le milieu réactionnel ; on parle de blocage cinétique. Pour cela, le protocole expérimental propose souvent de verser une certaine quantité d’eau glacée dans le mélange réactionnel (trempe), on agit donc sur deux facteurs cinétiques ; la concentration des réactifs et la température. Retour sur le TP-6 Conclusion : (à retenir) •  La température

égal dans les conditions de la mesure à 5 000 mol-1.L.cm-1. La cuve utilisée a une largeur de 1 cm. Le milieu réactionnel, tamponné à pH 7 et thermostaté à 30 °C, contient une concentration saturante en substrat. Son volume est de 3 mL. On utilise pour la détermination 100 µL d'extrait de E diluée au 500ème. On arrête la réaction en ajoutant 2 ml de réactif d'arrêt au milieu réactionnel après 2 minutes de temps de réaction. La variation d'absorbance lue est égale à 0,6 unité d'absorbance. Calculer

partie linéaire de la courbe P=f(t). Cette méthode consiste à introduire dans une cuve à spectrophotomètre 0,4mL de substrat (l'ONPG) et 2,4mL de solution tampon à pH7 ensuite préchauffés dans le spectrophotomètre thermostaté afin que le milieu réactionnel soit à bonne température. Puis 200µL d'enzyme (la β-galactosidase) sont introduits dans la cuve et on mesure l’absorbance du milieu régulièrement pendant 15 minutes. Ainsi on établit une courbe de l'absorbance en fonction du temps. La pente de la

milieu réactionnel): - mesure de pression - mesure de conductance G ou conductivité σ - mesure de volume gazeux 1.2.1. (0,25) A est proportionnelle à c, donc A = k.c soit k = [pic] (0,25)Avec le couple de valeurs proposé k = [pic] = 3,4×102 L.mol–1 1.2.2. Le mélange réactionnel absorbe de la lumière à cause de la présence du diiode. L'absorbance est proportionnelle à la concentration en diiode notée c. On a donc c = [pic] (0,25)[pic]= c . V avec V volume du mélange réactionnel = V1+ V2

mol/L 9 mL d’eau T = 40 ° C Lorsque la température augmente, la vitesse de la réaction augmente. b) Conclusion La température d’un mélange réactionnel est un facteur cinétique. L’avancement temporel d’une réaction augmente généralement avec la température. VI. Applications. 1)- La trempe. La trempe désigne le refroidissement brutal d’un milieu réactionnel pour le rendre cinétiquement inerte. On utilise ce procédé lors de dosages en séances de travaux pratiques pour arrêter la réaction à un instant

formées dans le milieu réactionnel en fonction du temps de la réaction Quelle dilution allez-vous utiliser pour la suite? Quantité de pNp formée dans le milieu réactionnel en fonction du temps de réaction: Nous allons utiliser la dilution 25x car elle offre une absorbance élevée et car elle est linéaire. Calculer l’activité spécifique du l’enzyme (µM de pNp formé/min .mg PPase) pour les 3 dilutions. Dilutions | µL de PPase dans le milieu réactionnel | Quantité de PPase