Chromatographie préparative

COMPTE RENDU N°1, ENZYMOLOGIE : La lactate déshydrogénase, purification partielle par chromatographie d’affinité But : Purifier la lactate déshydrogénase. Nous disposons d’un extrait de tissu bovin fœtal. Purification partielle sur gel de bleu de Cibacron et mesure de l’activité enzymatique 1ère étape : Vérifier la présence de l’enzyme dans notre tissu. Réaction d’oxydation du lactate (dans les mitochondries) : Lactate + NAD + Pyruvate + NADH,H+ Si notre

Identification des produits d’hydrolyse Par quelle technique peut-on identifier les produits d’hydrolyse? Chromatographie Méthode d’analyse qui sépare les constituants d’un mélange par entraînement à l’aide d’une phase mobile liquide le long d’une phase stationnaire solide qui porte les solutés à séparer. La phase mobile migre par capillarité dans le support vers le haut : c’est donc une chromatographie ascendante. Deux forces principales vont sur les molécules de solutés : - force de migration due

DUT 1 Semestre 2 Sommaire Introduction p.1 I / Principe de la séparation p.1 1) Méthodes p.1 a – Préparation de l’extrait brut b- Chromatographie d’affinité et d’exclusion 2) Résultats et discussion p.5 a – Chromatographie d’affinité b- Chromatographie d’exclusion II / Etude des fractions purifiées p.7 1) Méthodes p.7 2) Résultats et discussion p.8 a – Détermination des concentrations en protéines b-

Le tutorat est gratuit. Toutes reproductions ou vente sont interdites. Enzymologie : Calculs Résolution de QCM
Activité enzymatique • On constate après incubation de 30 minutes, en présence de 0,5 ml d’un sérum dilué 100 fois, une hydrolyse de 150 nmol de paranitrophénylphosphate, substrat de la phosphatase alcaline. L’activité phosphatase alcaline du sérum, exprimée en UI/L de sérum sera : 150 . 10-3 μmol x 100 (dilution !) AE = ------------------------------------------------ = 1000

autres constituants du sirop, présentent une affinité chimique avec les molécules qui constituent la laine. Cette affinité dépend du pH. La fixation se fait en milieu acide, la récupération des colorants en milieu basique. II-Chromatographie sur couche mince : les colorants d'un sirop de menthe De nombreuses préparations alimentaires industrielles utilisent des colorants alimentaires. L'utilisation de ceux-ci est réglementé Ainsi des colorants utilisés précédemment (l'amarante

TP5 préparation : I Définition et principe La chromatographie sert à séparer et identifier les espèces chimiques présentes dans un mélange. La séparation chromatographique consiste d'abord à déposer le mélange en bas d'un morceau de papier. Puis on trempe ce papier dans un solvant, qui, par capillarité, entraîne les différents constituants du mélange plus ou moins vite et haut, suivant leurs caractéristiques propres : affinité avec le support (papier), avec le solvant lui-même, taille des constituants

reconnaissance permettent d’identifier certaines espèces. La lecture d’un chromatogramme permet de distinguer mélanges et corps purs. Analyser la formulation d’un médicament : principe actif et excipients. Réaliser et interpréter une chromatographie sur couche mince. Activités, page 30 Cours, page 34 L’essentiel, page 37 Exercices, page 38 Culture et métiers, page 42 Identifier une espèce chimique solide grâce à sa température de fusion. Sur http://www.fisix.fr : ce document

obtenir des informations sur la composition en acides aminés d’une protéine : I- la détermination du nombre d’un acide aminé particulier, la tyrosine, grâce à un dosage spécifique, II- la détermination d’une composition en acides aminés par chromatographie sur couche mince. Ces deux techniques ne permettent pas, à elles seules, de connaître la composition en acides aminés d’une protéine mais donnent des informations partielles qui rajoutées à d’autres permettrons de connaître cette composition

extraire les lipides et les séparer des autres molécules biologiques qui constituent également le jaune d’œuf. Pour ce faire, nous allons utiliser leur différence de solubilité pour isoler les lipides pour ensuite les caractériser à l’aide de deux chromatographies sur couche mince. Principe  Sachant que les lipides sont solubles dans un solvant organique, si l’on place des morceaux de jaune d’œuf dans un solvant, le mélange résultant sera liquide. De ce fait, nous pourrons distinguer une partie liquide

dosant la tyrosine libre qui est un acide aminé libre facile à doser, on pourra déterminer la concentration en caséines dans une solution, avant de nous attarder sur la constitution d’une protéine en acides aminés, à l’aide d’une séparation, par chromatographie de partage, d’acides aminés provenant d’hydrolysat de caséines. Résultats-Discussions I. Précipitation des caséines La masse de caséine obtenue est de m1=0.65g et m2 =. Posons : Cm la concentration massique (ou pondérale) dans Vl volume