Chromatographie préparative

qu'était la caféine, sa composition et dans quel boissons était t'elle et dans quel proportion Nous avons répondu par le biais d'expérience et de recherche diverse   • Nous avons extrait la caféine du café en poudre   • Nous avons fait un chromatographie avec celle extraite et de la caféine de commerce pour voir si cela correspondait • Enfin nous avons fait des recherches sur la caféine quel était sa composition et dans quelles boissons elle était Ensuite, nous avons

Lactate déshydrogénase : purification partielle par chromatographie d'affinité La lactate déshydrogénase (LDH) est une enzyme présente dans une grande diversité d'organismes, aussi bien végétaux qu'animaux. Elle catalyse la conversion réciproque de la pyruvate et de la lactate accompagnée de la conversion concomitante du NADH en NAD+ (et inversement). Ce tétramère est composé de 4 sous unité (isoenzyme) différents de par leurs constance cinétiques et leurs pH isoélectriques. Le but de ce TP

fois injecté dans le sang va clivée le facteur II en facteur IIa et provoquer une importante thrombose. Dans ce TP nous allons donc chercher à isoler (purifier) la prothrombine de deux manières différentes : par précipitation au BaCl2 et par chromatographie échangeuse d'ion . Nous allons ensuite essayer de déterminer l'activité enzymatique de la prothrombine transformé en thrombine, sous l'action de l'écarine et grâce à un substrat chromogénique. II. Matériel et méthodes : '' précipitations

résultats. - Choix d’un extrait ECn plus intéressant … - 2ème partie expérimentale : série de manipulations 2. Méthodes et résultats. Suite de l’exemple : - Activité : à partir de l’extrait ECn, réalisation d’une purification de E par chromatographie (d’affinité, CEI, …). Suivi de purification par dosage protéique et recherche d’activité de E. - Détailler la méthode : choix, principe, conditions chromatographiques ? - Résultats : chromatogrammes, dosages, activités des fractions. - Sytnhèse

recristallisation. Prérequis • Structure et représentations des composés organiques (Première S). • Groupe caractéristique ester ; hydrolyse des esters (Terminale S). • Polarité des molécules ; relations structures-propriétés (Première S). • Chromatographie sur couche mince (chapitre 10). 139 11Expérimenter Chapitre Expérimenter Extraction de substances naturelles 4. Extraire des huiles essentielles au laboratoire Les clous de girofle et les noix de muscade contiennent des substances

constitue la phase inférieure du distillat. Phase aqueuse : eau salée + eaux aromatiques Phase organique : huile essentielle de menthe + dichlorométhane 2. Analyses qualitative et quantitative des colorants contenus dans le sirop 2.1. Chromatographie des colorants 2.1.1. Les taches obtenues étant colorées, une révélation du chromatogramme est inutile. 2.1.2. Le centre de la tache jaune est à la même hauteur que le centre de la tache jaune du colorant E102 (jaune tartrazine). Or pour une même

déshydrogénase (LDH) est l’enzyme catalysant la réaction : L-lactate + NAD+ Pyruvate + NADH + H+ Elle existe sous 5 formes rmes d’isoenzymes qui différent par leur pH isoélectrique. ➢ Chromatographie d’affinité Afin de la purifier un extrait de tissu fœtal bovin contenant cette enzyme, on réalise une chromatographie d’affinité. Le bleu de Cibacron qui présente une analogie avec le cofacteur NADH, le ligand naturel de la lactate déshydrogénase, est fixé par liaison covalente sur des billes de gel

|14 | |chap. 5 – activité 2 – p.41 | | |Qu’est-ce que la chromatographie ? |16 | |chap. 6 – activité 1 – p.48 |

colorant. Extraction et chromatographie. Synthèse d’un colorant. Références par rapport au programme Cette activité illustre le thème OBSERVER et le sous thème Matières colorées en classe de 1ère S Notions et contenus Colorants, pigments ; extraction et synthèse . Compétences attendues Pratiquer une démarche expérimentale mettant en œuvre une extraction, une synthèse, une chromatographie. Conditions de mise en œuvre Pré-requis : Filtration sur Büchner – Chromatographie - Sécurité Durée : 2

CHROMATOGRAPHIE D'EXCLUSION SUR GEL DE SEPHADEX INTRODUCTION : On se propose au cours de ce TP de séparer un mélange de deux macromolécules protéiques de masses moléculaires différentes (SAB et cytochrome c ) par méthode de chromatographie d'exclusion sur gel séphadex (G50) en déterminant les caractéristiques de notre colonne par exclusion grâce au dextran bleu , de vérifier ensuite notre séparation par spectrométrie et de doser par méthode de Lowry et al nos fraction obtenue .