Enzyme De Restriction

plasmides 1.3.2. Purification par Lyse alcaline 1.3.3. Purification par Gradient de chlorure de césium 2.Séparation des acides nucléiques 2.1.Electrophorèse sur gel d’agarose 2.2.Electrophorèse sur gel de polyarylamide 3.Elaboration de Cartes de restrictions des 1.Purification des acides 1.1.Extraction nucléiques de =technique l’ADN permettant d'isoler l'ADN de cellules ou de tissus. L'ADN extrait  digestion, hybridation (Southern blot), séquençage, PCR, clonage… Différents protocoles pour extraire

construire une banque d'ADN. La première consiste à fragmenter la molécule d'ADN à l'aide d'enzymes de restriction, la seconde consiste à purifier de l'ARN messager qui seront ensuite transcrit en ADN complémentaire (ADNc) par une transcriptase inverse. 1. 1. Préparation d'une banque d'ADN à l'aide d'enzymes de restriction : banque d'ADN génomique. Préparation de l'ADN. Les enzymes de restriction (voir polycopié introduction au génie génétique) sont des nucléasse purifiées à partir de bactéries qui

contact de l'ADN avec des enzymes de restriction qui ont la capacité de couper en deux les sites spécifiques des molécules nucléiques. A l'aide un marqueur de poids moléculaire nous devons déterminer, selon l'enzyme de restriction utilisée, la quantité d'ADN digérée d'après la distance de migration des fragments obtenus. Résultat On constate que les molécules d'ADN du premier jusqu'au troisième puits ont été digérées par les enzymes de restrictions. L'ADN du premier puits

(dilué à 100 ng/µl) ou de l’eau (pour le témoin négatif). 4. Digestion enzymatique Pour ce faire, on utilise des enzymes de restriction (respectivement FokI pour COI et RsaI pour 28S). Ces enzymes de restriction ont pour but de couper spécifiquement un fragment d’ADN au niveau d’une séquence nucléotidique caractéristique appelée site de restriction. La digestion enzymatique se fait à 37°C pendant 1h30. Préparation du mix pour Rsal et Fokl: 5. Electrophorèse

Compte rendu de TP : Digestion d’ADN plasmidiques par des enzymes de restriction Introduction : Le but de ce tp est de mettre en place la digestion d’ADN plasmidiques issus de deux clones différents, par différentes enzymes de restriction et ainsi pouvoir déterminer si le clonage a réussi. Pour cela, nous allons réaliser la digestion de l’ADN puis effectuer une électrophorèse. Matériel et méthodes : Pour faire ce tp, nous allons utiliser des ADN plasmidiques issu de deux clones différents

sites de restrictions uniques pour différents enzymes de restrictions. La plasmide utilisé dans cette expérience est le pBlueScript, il possède des sites de coupure unique pour 7 enzymes de restrictions dont EcorI et HindIII, ainsi qu'un gène de résistance à l'ampiciline. Le gène de résistance permet à une culture en présence d'ampicilline de sélectionner toutes les bactéries ayant incorporés BlueScript, que ce BleuScript contienne ou non l'insert ( le fragment d'adn phage lambda). Les enzymes de restrictions

confirmée lorsque l'individu testé présente des anticorps dirigés contre : - au moins deux glycoprotéines membranaires différentes (gp 160, gp 120, ou gp 41) - au moins une protéine membranaire ou interne (p 55, p 40, p 25, ou p 18) - au moins une enzyme virale (p 68, p 52 ou p 34)   Document 2 : Dénombrement des populations de LT4 chez trois individus D'après Inrp, access, biotic Individus testés | Individu témoin séronégatif | Individu A résultat au 11/04 | Individu B résultat au 12/07

est transcrite en ARNm. Ce transfert d’informations repose sur l’appariement des bases complémentaires. La transcription se déroule en trois faces. INITIATION : une partie de la molécule d’ADN se fend en deux longitudalement sous l’action d’une enzyme (protéines qui ont des fonctions), l’ARN polymérase qui rond les ponts hydrogènes entre les bases des deux chaines d’ADN. ELONGATION : les nucléotides libres (A U C G) viennent prendre place les uns à la suite des autres sur le brin codant de l’ADN

va falloir ouvrir le plasmide. On le découpe à l’aide de « ciseaux moléculaires » qui sont des enzymes de restrictions. Elles vont couper des séquences d’ADN, et une fois qu’on a ouvert le plasmide, on va coller l’ADN d’intérêt à l’aide d’une « colle » qui est la ligase. Préparation des enzymes de restrictions : Ce sont les enzymes qui permettent d’ouvrir un ADN double brin. Une enzyme de restriction ne reconnait qu’une seule séquence, cette séquence est palindromique c’est-à-dire qu’on peut

ou de polyacrylamide est une des plus communément utilisées car elle permet de séparer des molécules en fonction de leur taille, préalable indispensable dans de multiples applications, notamment pour identifier des fragments d’ADN découpés par des enzymes, pour identifier un gène ou pour établir des empreintes génétiques par Southern Blot.  L’électrophorèse d’ADN sur gel d’agarose ne présente guère de difficultés techniques et peut être utilisée aisément en travaux pratiques tant à l’université qu’au