Enzyme De Restriction

pUT 654 3. Plasmide pUT 807 4. Intérêt du plasmide pUT 807 II. Principe des méthodes utilisées. 1. La PCR 2. Intérêt de la PCR et conditions opératoires 3. Réactions enzymatiques : restriction et ligation 4. Electrophorèse en gel d’agarose a) Migration/Séparation b) Conditions opératoires c) Visualisation d) Purification III. Résultats et discussion

BamH I. Axe de symétrie On rappelle que la spécificité des endonucléases de restriction est de : ! ! Reconnaitre des séquences de bases spécifiques dans la double hélice d’ADN - 4 à 15 paires de bases - usuellement des palidromes Cliver les deux brins du duplex en des endroits très spécifiques par hydrolyse de la liaison phosphodiester pour obtention d’un fragment de restriction 4) Soient les enzymes de restriction BamH I, Pst I, Xho I et Mbo I dont les sites reconnus sont : BamH I : 5' G/GATCC

Responsable du TP: S. GONZALEZ-RIZZO Département de Biologie UFR SEN U.A. 3 Séance No. 1 METHODE ELISA Partie I PRINCIPE La technique ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) est une réaction immuno-enzymatique au cours de laquelle la liaison entre l’antigène (Ag) et l’anticorps (Ac) est mise en évidence par une réaction enzymatique colorée. Une enzyme, préalablement couplée à l’anticorps, catalyse une réaction chimique qui transforme son substrat en composé coloré. Il existe différentes méthodes

CHAIN REACTION) 1. Un échantillon de sang par exemple est prélevé 2. L’ADN est extrait des globules blancs 3. Si l’échantillon est très petit, on l’amplifie à des millions d’exemplaires à l’aide d’une enzyme : la polymérase 4. On mélange ensuite l’ADN et ses copies à des enzymes de restriction, sorte de « ciseaux biologiques » qui les coupent en millions de petits fragments. Toutefois l’enzyme conserve entière les régions répétitives, non codantes, qu’on veut examiner : ces régions contiennent

les deux brins. Les éléments nécessaires à cette réplication sont présents dans le tube, à savoir : 1. l’enzyme Taq polymérase : c’est une polymérase thermostable, extraite d’une bactérie (Thermus aquaticus) des sources chaudes (80-90°C). D’autres enzymes thermorésistantes sont actuellement utilisées t proviennet d’autres microorganismes : la pfu extraite de Pyrococcus furiosus et Vent extraite de Thermococcus liforalis. 2. les nucléotides triphosphates : Au départ on utilisait des concentrations qui

chez la levure Saccharomyces cerevisiae pour l'étude de l’interaction entre les protéines H-Ras et c-Raf humainesPaul-Alexandre Laget, Lys PaulusL3 Ecologie et Biologie des OrganismesAnnée universitaire 2022-2023INTRODUCTION La protéine c-Raf est une enzyme kinase de la famille des sérine/thréonine. Elle joue dans la régulation de la différenciation et de la prolifération en induisant la mitose par une cascade de signalisation permettant l'activation de la transcription ou encore la transduction à la

d'hélice gauche dans le cas très particulier des poly G-C (ADN Z). I.1.5- Les interactions avec des protéines dans le grand sillon. Les interactions qui ont lieu entre une protéine et une séquence d'ADN spécifique (par exemple avec les enzymes de restriction) se passent dans le grand sillon. En effet, ces interactions sont principalement basées sur possibilité de former des liaisons hydrogène : dans le petit sillon, les paires CG et GC donnent la même information, ainsi que les paires AT et

avec les lentivirus IV. Matériels p7 a. Préparation de l’ADN plasmidique b. Les plasmides c. La culture cellulaire d. Les vecteurs lentiviraux e. Le gène d’intérêt f. Les enzymes de restriction V. Méthodes p9 a. Transformation b. Transfection c. Digestion d’un plasmide d. Titration par cytométrie de flux VI. Résultats p13 a. Amplification d’un plasmide

bioinformatique Partie 1 : 3. 1er gène : -son nom est « cat » et son produit la chloramphénicol acétyltransférase (enzyme) -il est situé entre les nucléotides 1816 et 2475 -la séquence correspond au brin antisens car il y a la mention « complement » -l’ARN polymérase se fixe sur la séquence Genbank 2ème gène : -son nom est « bla » et son produit est la beta-lactamase (enzyme) -il est situé entre les nucléotides 5282 et 6142 -la séquence correspond au brin antisens car il y a la mention

Regulation de la RNA polymerase 75 4.15 Elongation de la transcription 76 4.16 Elongation de la transcription 77 4.17 Discontinuite des genes 78 4.18 Exon 79 4.19 Exon 1 80 4.20 Fin de la transcription 81 4.21 Modifications du transcrit 82 4.22 Enzyme coiffante 83 4.23 Coiffe d�fun messager 84 4.24 Queue polyA 85 4.25 Le transcrit primaire 86 4.26 Excision - epissage 87 4.27 Formation du lasso 88 4.28 Epissages alternatifs 89 4.29 Maturation des RNA ribosomiques 90 4.30 Stabilite du messager