Équation de Michaelis-Menten

utiliserons un substrat synthétique incolore ; le p-nitrophénolphosphate (PNPP) car, après action de l’enzyme, on obtient le p-nitrophénol (PNP) qui est un chromophore. C’est un produit coloré et il est directement dosable par spectrophotométrie à 410 nm. Equation de la réaction : PNPP + H2O  2 PNP + HPO42- Gamme étalon La réalisation d’une gamme étalon nous permet de déterminer, pour une absorbance donnée, la concentration inconnue de produit

du substrat -Étudier l'effet de la concentration sur l'activité enzymatique -Déterminer la vitesse maximale Vmax et la constante de Michaelis Km. Introduction La cinétique concerne l'étude des vitesses de réactions ainsi que les conditions qui influencent cette vitesse de réaction. En cinétique, on classe les réactions par ordre selon la façon dont la vitesse est influencée par la

Etude cinétique de la trypsine I. But Le but de ce TP est de déterminer les paramètres cinétiques de la trypsine : * Le KM qui correspond à la constante de Michaelis ; * La Vmax qui correspond à la vitesse maximale et ; * v, la vitesse initiale. II. Principe La trypsine est une enzyme digestive du suc pancréatique qui a pour but de digérer les protéines. La trypsine est une endoprotéase qui hydrolyse les liaisons peptidiques dans lesquelles un acide aminé basique, la

Chapitre 4: Vitesse initiale d’une réaction enzymatique et équation de MICHAELISPr. Richard G. Maroun Enzymologie Fondamentale et Moléculaire EFMBL4Chapitre 4: Étude des réactions enzymatiques à l’état stationnaire (un seul substrat). Vitesse initiale d’une réaction enzymatique et équation de MICHAELIS Pr. Richard Maroun 21. Les enzymes Michaeliennes  Il existe plusieurs mécanismes enzymatiques différents selon l'enzyme considérée:  Les enzymes dites michaeliennes: Chaque site actif se comporte

concentration d’enzyme Lorsque [enzyme] Km et donc (13) [S]/([S] + Km) tend vers 1. Il s’ensuit que Vmax = k3[E]totale La substitution de l’éqn 13 dans l’éqn 12 donne l’équation de MichaelisMenten: [S] (14) V =V max [S] + K m L’équation de Michaelis-Menten décrit la courbe cinétique de Vo-[S]: - Pour des concentrations faibles de substrat, lorsque [S] >Km, V = Vmax et la vitesse est indépendante de la concentration de substrat. - La signification de la constante Km est évidente. Lorsque [S] = Km

Biochimie | TD : Détermination des paramètres cinétiques Vmax (activité catalytique) et KM (constante de Michaelis) de la -galactosidase | a) Données Boehringer :-D-galactoside galactohydrolase EC 3.2.1.23, isolée d’Escherichia coli. La -galactosidase hydrolyse les résidus -galactopryranosyl de diosides comme le lactose (Gal14Glc) et le lactulose (Gal14Fru) ; d’hétérosides comme l’ONPG (2-nitrophényl -galactoside). La -galactosidase d’Escherichia coli, dont la masse molaire est de 540

consommation de moins d'1 % du substrat). C'est la vitesse d'intérêt mesurée lors de l'étude la cinétique des enzymes. I.C.2) Étapes 1. Formation d'un complexe ES (enzyme substrat) k1 en mol-1.L.s-1 k-1 en s-1 ES est appelé complexe de Michaelis-Menten. On définit à partir de ces constantes une constante d'affinité kaff et de dissociation kd : 2. Catalyse Succession de réactions intermédiaires permettant la transformation du substrat en produit. k2 est aussi appelé kcat ou constante catalytique

BGSTU Modèle de Michaëlis – Menten (1913) Adapté à de nombreuses enzymes simples K1 E+S K2 E+P ES K-1 K-2 Hypothèses : [P]0  0 Leonor Michaëlis [S]  [S]0 ES  E + S beaucoup + rapide que ES  E + P [S]0 > [E] K1 E+S ES K2 E+P K-1 Equation de Michaëlis Menten : vi = Vm x [S] Km + [S] Constante Km de Michaëlis Menten : Km = [S] pour que vi soit ½ de vm  constante spécifique d’une enzyme pour un substrat donné  d’autant + faible que l’affinité est grande Maud Menten Biochimie et

la réaction. De plus, on tente d’élucider l’effet du pH sur la réaction ainsi que l’effet de la concentration du substrat. Pour ce faire, on s’appuie sur les équations et les graphiques de Michaelis-Menten et de Lineweaver-Burk (double réciprocque) afin d’évaluer les valeurs de la vitesse maximale (VMAX) et de la constante de Michaelis-Menten (KM) d'une réaction enzymatique, toutes deux caractéristiques à l'enzyme et au substrat employés. Le graphique de Lineweaver-Burk est en fait une représentation

représentation de Michaelis-Menten: (voir annexe 3) Graphiquement nous avons trouvé une valeur de Vmax d’environ 0,024 mM/min Et de fait nous avons pu déterminer Km = 0,0275 mM Cette détermination n’est pas assez précise. En effet, dans la représentation de Michaëlis-Menten, Vmax correspond à la limite de la courbe, du fait qu’il s’agit d’une représentation hyperbolique, or cette limite est inaccessible. Il est alors nécessaire de linéariser l’équation de Michaelis-Menten sous la forme y =