Etude Cinetique Phosphatase Alcaline

DETERMINATION DE LA VITESSE INITIALE D'UNE REACTION ENZYMATIQUE COURBE [P] = f (t) I. PAR METHODE CINETIQUE L'enzyme étudiée est la phosphatase alcaline qui catalyse l'hydrolyse des liaisons esters lorsque l'acide engagé est l'acide phosphorique mono estérifié. On utilise la cinétique d'hydrolyse du PNPP (ParaNitroPhényl Phosphate) à 20°C à pH=9,8. Le PNP (ParaNitroPhénol) est jaune en milieu alcalin. On peut donc suivre l'apparition du PNP au cours de l'hydrolyse en enregistrant l'absorbance du

Etude expérimentale de la phosphatase alcaline I. BUT : Etude cinétique de l’activité enzymatique d’une enzyme la phosphatase alcaline .On procède à :  Une étude cinétique de la libération des produits de la réaction.  Etude de l’influence de la concentration de substrat(PNPP) sur la vitesse de la réaction.  Etude d’un phénomène de compétition entre deux substrats. II. PRINCIPE :  L’ étude cinétique de la libération des produits de la réaction

BCH2008L Enzymologie et Métabolisme ___________________________________________________________________ Page | 1 ETUDE CINETIQUE DE LA PHOSPHATASE ALCALINE Les phosphatases ou phosphomonoestérases (EC 3.1.3.1) sont des enzymes qui hydrolysent les monoesters phosphoriques avec formation d’un ion phosphate et d'un alcool (ou d’un phénol), selon la réaction : R-O-PO3 2- + H2O  R-OH + HPO4 2- Méthodologie Le but du TP est d’étudier l’influence de la concentration de initiale substrat ([S]0)

ÉTUDE CINÉTIQUE DE LA PHOSPHATASE ALCALINE ET DÉTERMINATION DU pH OPTIMUM BUT: Connaître les caractéristiques de la phosphatase alcaline tels que la Vm, le Km et le pH optimum. Lors de ce T.P. On étudiera donc les propriétés phosphatase et alcaline de cette enzyme. Une phosphatase est une enzyme qui hydrolyse un monoester phosphorique et forme un phosphate et un alcool ou un phénol: R-O-PO32- + H2O → R-OH + HPO42- Pour connaître le Vm et le Km de cette enzyme, on a besoin

TP ENZYMOLOGIE ETUDE CINETIQUE DE LA PHOSPHATASE ALCALINE ET DETERMINATION DU PH OPTIMUM Introduction Les phosphatases sont des enzymes qui hydrolysent les monoesters phosphoriques. Ici, on étudiera les effets de l’enzyme sur le PNPP. La phosphatase alcaline hydrolyse le PNPP suivant la réaction suivante : PNPP + H2O PNP Cette réaction libère du PNP. Le PNPP est incolore, alors que le PNP est jaune en milieu alcalin, ce qui permet de le doser directement par spectrophotométrie à 410nm

ENZYMOLOGIE EN PHASE HOMOGENE: ETUDE DE LA PHOSPHATASE ALCALINE Les phosphatases ou phosphomonoestérases sont des enzymes qui hydrolysent les monoesters phosphoriques avec formation de phosphate minéral et d'un alcool ou d'un phénol, selon la réaction: R-O-PO32- + → R-OH + HPO42- METHODOLOGIE La manipulation permet l'étude de l'influence de plusieurs facteurs sur la réaction enzymatique. L'enzyme utilisée est une préparation commerciale partiellement purifiée de phosphatase intestinale de veau, la réaction

BCH2008L Enzymologie et Métabolisme ___________________________________________________________________ ETUDE CINETIQUE ET DETERMINATION DU pH OPTIMUM DE LA PHOSPHATASE ALCALINE Les phosphatases ou phosphomonoestérases sont des enzymes qui hydrolysent les monoesters phosphoriques avec formation de phosphate minéral et d'un alcool ou d'un phénol, selon la réaction : R-O-PO32- + H2O  R-OH + HPO42- Méthodologie La manipulation permet l'étude de l'influence de plusieurs facteurs sur la réaction

TP : étude expérimentale de la phosphatase alcaline But Nous cherchons à déterminer les paramètres cinétiques d’une enzyme, la phosphatase alcaline, en présence d’un ou de deux substrats. Pour cela nous avons, dans un premier temps, étudié l’activité de cette enzyme en présence de différentes concentrations d’un seul substrat. Ce qui nous a ensuite permis de l’étudier en présence de deux substrats. Principe Le p-nitrophényl phosphate (PNPP), qui sera notre premier substrat, est un composé

TP4 EFFET DE LA TEMPERATURE SUR LA PHOSPHATASE ALCALINE OBJECTIF : étudier l'influence de la température sur la vitesse de la réaction enzymatique ainsi que la stabilité de l'enzyme soumise à une température dénaturante. 1. ORGANIGRAMME Conditions opératoires pour les manipulations : Tampon TGN pH = 10,5 Températures de mesure d'activité = 37°C ou variable Volume réactionnel 2,5 mL dont 0,05 mL de PAL Cinétique en 2 points Δt = 2 minutes Réactif d'arrêt : NaOH, volume de lecture au spectrophotomètre

TP : ETUDE EXPERIMENTALE DE LA PHOSPHATASE ALCALINE BUT Nous allons déterminer les paramètres cinétiques d’une enzyme en étudiant l’influence de la concentration en substrat et celle de la présence d’un inhibiteur dans le milieu réactionnel. On va mesurer l’activité de l’enzyme en mesurant par spectrophotométrie l’apparition du produit de la réaction qui sera coloré. PRINCIPE Nous allons utiliser dans ce TP la phosphatase alcaline de veau. C’est une enzyme à 2 substrats qui à un pH optimal