Ligase

que celle du virus peut être encapsidée Cycle du phage lambda b-clonage d’ADN étranger dans un vecteur -Digestion de l’ADN plasmidique -Déphosphorylation des extrémités 5’ du plasmide -Purification du fragment à intégrer -Ligation par une ligase + ATP -vérification par électrophorèse Clonage de bouts francs : + difficile Rendre les extrémités de l’insert et du plamide cohésives : + efficace 2 Il faut amplifier le vecteur recombinant c- du plasmide pBR 322 au phagemides, cosmides

d'échantillon pour précipitrer l'ADN en présence d'acétate de sodium 3M pH 5. 3. Ligature: Le produit de PCR est ensuite ligature dans le plasmide en présence du tampon de ligature (2X), l'insert et le vecteur dans un rapport de 2/1, la T4 DNA ligase (3U/µL) et de l'eau (qsq 10µL). 5.Transformation bactérienne On ajoute le produit de la ligature à des bactéries traitées au CaCl2 et on soumet l'ensemble à un bref choc thermique (placé sur la glace ,transfère dans un bain-marie (42°C, 50'')

d'origine et d'une chaîne complémentaire synthétisée que l'on a qualifié cette réplication de semi-conservative. Tous ces mécanismes de réplication ne sont possibles que grâce à un complexe multienzymatique, dont l'ADN polymérase et une ligase. C'est en 1957 que la première enzyme de polymérisation nucléotidique a été découverte et nommée ADN polymérase. Elle permet la reconnaissance de chaque nucléotide de l'ADN dont les deux brins ont été séparés, par un nucléotide complémentaire non

enzyme ? ☺  Vous connaissez le numéro EC (enzyme commission number) et vous cherchez une source de l’enzyme : o Classe 1 : Oxydo-réductases o Classe 2 : Transférases o Classe 3 : Hydrolases o Classe 4 : Lyases o Classe 5 : Isomérases o Classe 6 : Ligases  Chaque enzyme a un numéro E.C. unique composé de 4 parties o (X.-.-.-) : division principale dans laquelle l’enzyme est classée, o (-.XX.-.-) : sous-classe d’enzyme, o (-.-.XX.-) : sous-sousclasse d’enzyme, o (-.-.-.XXX) : numéro de série de l’enzyme

retirée (coupe la liaison phosphodiestser du côté 5’) donnant une extrémité 3’-OH. Une exonucléase coupe la liaison phosphodiester du côté 3’. b- L’ADN polymérase comble la brèche en ajoutant les nucléotides complémentaires à l’autre brin. L’ADN ligase scelle les deux segments du brin.21 Réparation par excision de nucléotides (REN) Un complexe de gènes dénommés uvrA, uvrB, uvrC et uvrD codant pour quatre activités enzymatiques est impliqué dans la reconnaissance et la réparation des lésions. La

ainsi d’yeux de réplication -l’élongation : sous l’action de l’ARN polymérase une amorce d’am est réalisée. Puis sous l’action de L’ADN polymérase, les nucléotides d’ADN sont liées. L’ADN polymérase hydrolyse ensuite l’amorce -la terminaison : des ligases lient entre aux les brins d’ADN néoformés MITOSE : 4 phases : -prophase : l’ADN se condense -métaphase : les chromosomes s’alignent selon le fuseau mitotique -anaphase : migration des chromosomes vers les centrioles -télophase : la membrane

poids normal . Les dpenses lies lobsit reprsenteraient 3 et 7 de lobjectif national des dpenses dassurance maladie (Ondam) pour 2008. Au rythme actuel de la progression de lobsit, ce cot pourrait doubler dici 2020 et reprsenter 14 de lOndam. Selon lIgas, le surcot de lobsit se situe aux alentours de 5 milliards deuros, mais pour lInspection gnrale des finances il atteindrait entre 11,5 et 14,5 milliards. Ces donnes franaises concordent avec celles des pays europens. Plus que leur valeur absolue, sur

NH2-met-leu-asn-stop-gly-COOH C. NH2-met-leu-asn-COOH D. NH2-leu-pro-gly-COOH E- Aucune de ces propositions 9) Quelles sont les enzymes qui interviennent dans la réplication A. une ARN polymérase B. des topoisomérases C. des transposases D. des ligases E. EcoR I 10) Dans la séquence suivante du gène d'une protéine CAGGCCGAGGCCAAAGTAAATCTCA correspondant à l’extrémité 3’ de l’exon 3, qui se traduit par Gln Ala Glu Ala Lys, indiquer quelle transition G→A (nucléotides soulignés) est susceptible d’entraîner

pour laisser la place à l’ADN polymérase III qui ajoute des nucléotides à l’extrémité de cette amorce dans le but de synthétisé le nouveau brin D’ADN. Ensuite, le travail de la synthèse du brin d’ADN nécessite l’ADN polymérase I et finalement l’ADN ligase. Ce travail est assez complexe, car il doit être fait avec précision pour ne pas entraîner de cellules cancéreuses. L’enzyme ADN polymérase III doit, en effet, s’assurer que chaque base azotée formant les brins fils est complémentaire aux bases azotées

d’ARNm, on utilise plusieurs enzymes spécifiques pour cette opération. Parmi les différents réactifs présentés sur la liste suivante, lequel est absolument indispensable à la préparation des ADNc ? A. L’ADN polymérase du phage λ B. La ligase de levure C. L’exonucléase intestinale D. La transcriptase inverse de rétrovirus E. La glucose-6-phosphate déshydrogénase d’E.Coli Question N° 45 : Pour construire une banque d’expression d’ADNc de tissu adipeux dans des phages