Ligase

(E. Coli) Fragment de Klenow T4 DNA polymérase Sequenase Taq polymérase Reverse transcriptase RNA polymérase II (réaction) RNA polymérases (phages) Poly(A) polymérase Chapitre 3 : 3.1 3.2 3.3 3.4 Les ligases DNA ligase (réaction) DNA ligase (E. Coli) DNA ligase (phage T4) RNA ligase (phage T4) Chapitre 4 : 4.1 Les isomérases Topoisomérase 2006 - 2007 Biologie génique - Pr A. Raisonnier 3/183 Plan du cours 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

ARNm. 1.4.7 Autres enzymes : Ligases d’AN 1.4.7.1 E coli DNA ligase Enzyme d’origine bactérienne effectuant des ligatures sur des fragments d’ADN uniquement à bouts cohésif (bouts décalés) 1.4.7.2 T4 DNA Ligase Enzymes extraite de bactéries infectées par le phage T4. Elle assure la même fonction qu’E coli DNA ligase Cette enzyme est utilisées dans toutes les opérations ou une ligation est nécessaire, que les bouts soit francs ou cohésifs. 1.4.7.3 T4 RNA ligase Enzyme extraite de bactéries

plasmide (pGEM-T) avec des extrémités T avec un insert (ADNc) ayant des extrémités A. Ainsi la ligase pourra relier l’extrémité 5’T à la 3’A de l’insert. Plusieurs tubes sont préparés : Lig TAT PGEMT/ADNc TAT/Ligase T - Lig PGEMT/Ligase T + Lig PGEMT/Insert contrôle/Ligase Tableau II : composition des tubes de ligations Dans ces tubes un tampon de ligation est ajouté pour améliorer l’activité de la ligase grâce au MgCl2 servant de cofacteur à l’enzyme (mg2+),au DTT qui va détruire les ponts disulfures

les populations précaires ou étrangères dont les traditions doivent être prises en compte. - Lorsqu’elles existent, les initiatives restent locales, les bons outils http://droitsdesmalades.fr/le-diabete-premiere-des-maladies-chroniques-en-france-ligas-re... 15/04/2013 Le diabète, première des maladies chroniques en France : l’IGAS recommande des actio... Page 2 sur 3 ressources locales insuffisantes. - Le diabète de type 2 devrait être peu coûteux puisque sa prévention et son traitement passent

le plasmide. On le découpe à l’aide de « ciseaux moléculaires » qui sont des enzymes de restrictions. Elles vont couper des séquences d’ADN, et une fois qu’on a ouvert le plasmide, on va coller l’ADN d’intérêt à l’aide d’une « colle » qui est la ligase. Préparation des enzymes de restrictions : Ce sont les enzymes qui permettent d’ouvrir un ADN double brin. Une enzyme de restriction ne reconnait qu’une seule séquence, cette séquence est palindromique c’est-à-dire qu’on peut la lire dans les 2

E1 Ub E3 E2 Ub ub ub ub Protéasome 26S Ub Ub FT Activateur FT Répresseur Voie réprimée Voie activée La famille des E3 ligases • 9000 gènes mis en évidence sont différentiellement exprimés pendant le développement du grain de blé. • 174 gènes ont été identifiés par analyse in silico comme E3 ligases. • Parmi ces E3 ligases, ils existent des gènes dits de type RBR qui sont surexprimés au cours du développement du grain de blé. IBR N-RING C-RING • L’étude de ces gènes

-topoisomérase (débarrasse des contraintes) -ADN polymérase -ARN polymérase -exonucléase -ligase ADN polymérase ne peut lire l’ADN que dans le sens 3’→ 5’ Et ne peut donc le synthétiser que dans le sens 5’→ 3’ Construction de 2 brins différente. L’un des brin sera continu appelé maître brin et l’autre discontinu appelé brin suiveur constitué de fragment d’Okasaki. L’exonucléase élimine l’ARN amorce et la ligase réunit tout les fragments. IV Les mutations « accident » de réplication Une mutation

FRANCESAS II. Francia en los año 30 ( Ligas: grupos de extrema derecha antiparlamentarios xenófobos (= odian a los extranjeros) y antisemitas (odio a los judíos) ▪ A partir de 1932, la crisis económica del 1929 llega a Francia y se produce una crisis social. Aumenta el paro y la demanda en el consumo de la producción. Los asalariados ven disminuir su poder adquisitivo. Los gobiernos, incapaces de solucionar la crisis, se van sucediendo y las ligas aprovechan la situación para reclamar un gobierno

de Mg2+. Toutes les séquences reconnues par ces enzymes n’ont pas la même taille (le plus courant : 6 nucléotides). Plus la séquence est grande, plus la fréquence de coupure est faible. Clonage : hybridation du vecteur, hybridation puis ligation (ligase avec de l’ATP va former un lien phosphoester, elle ne rajoute pas de base, l’ATP est là pour l’énergie). Etape 4 : transformation chez l’hôte, puis on place les bactéries sur du gel et les vides (celles qui n’ont pas incorporé le plasmide recombinant)

digéré -eau -ligase Colonies bleues environ 200 et colonies blanches environ 1568 ; D euxième boîte de Pétri  ( pBs et (2n)ADN) : Composition : -bactéries thermo-compétentes + ligation Ligation : -plasmide digéré -tampon de ligation -ADN lambda digéré -eau -ligase Colonies bleues environ 144 et colonies blanches environ 3200. Troisième