Plasmide

transfectées par un plasmide contenant le gène d’AmotL-1 p86-EGFP. 9 Transfection: Les cellules COS ou U251 entre 60 et 70 % de confluence, en boîtes de 6 puits (3 cm de diamètre/puits), ont été transfectées avec 1 µg du plasmide d'intérêt (EGFP-p86 AmotL-1) en présence de 3 µg de la Lipofectamine 2000 (Invitrogene) comme agent transfectiont dans de l'OptiMEM. Le protocole de la transfection se fait en deux étapes, une première étape où la lipofectamine et le plasmide d’intérêt sont incubés

cellules végétales était l'oeuvre de plasmides présents dans les souches virulentes de Agrobacterium. Dans le cas de la galle du collet ce plasmide est appelé Ti (pour Tumor inducing).[16] Enfin, en 1977, Mary Dell Chilton en association avec une équipe américaine, montrait que la transformation de cellules végétales par Agrobacterium tumefaciens résulte de l'intégration dans leur génome d'un fragment d'ADN (appelé ADN-T pour ADN transféré) issu des plasmides Ti. Les gènes portés par l'ADN-T ne s'expriment

pénicilline +100ug/mL streptomycine Conditions de culture: 37°C + humidité athm 5% CO2 et 95% air 9 Transfection de l’ARNsi dans les cellules  Cellules HEK 293: Plaqué dans puits un jour avant l’expèrience Co- transfecter avec plasmide et ARNsi  Plasmide: pEGFP/MDR1 contenant fragments du gène MDR1 fusionnés au gène EGFP 2h post transfection : mesure de fluorescence de EGFP dans les cellules par cytométrie de flux  Cellules HEK 293 +trypsine: Fixées dans 2% de formaldehyde dans un

classées selon deux types : les techniques de transfert direct et celles de transfert indirect. B - Techniques de transfert direct : La transformation directe consiste en l'introduction dans l’ADN d'un gène véhiculé le plus souvent par un plasmide* classique, par le biais de techniques physico-chimiques. Il existe plusieurs techniques de transfert direct que nous allons expliciter : l’électroporation, la micro-injection et la biolistique. 1 – L’électroporation : L'électroporation est

bactéries possèdent une caractéristique unique qui consiste à s’échanger de l’information génétique entre bactéries. Les bactéries sont dotées d’un plasmide (une unité indépendante du chromosome bactérien) qui contient plusieurs gènes (souvent des gènes de résistance). Lorsque deux bactéries viennent en contact (même d’espèces différentes), une copie du plasmide est échangée. Ces deux faits expliquent la majorité des cas de résistances, c’est-à-dire les cas où la bactérie produit une enzyme qui neutralise

la sonde peut être différente en fonction du site d’hybridation. 1 B - Nature des sondes Nature de la sonde ADNc double brin Origine de fabrication Obtenu par clonage dans un plasmide et amplifié par PCR - Forte stabilité Avantage - Obtenu en grande quantité ADNc monocaténaires Obtenu par clonage dans un plasmide et amplifié par PCR asymétrique - Forte Stabilité - Ne nécessite pas de dénaturation - Pas d’hybridation inter-sonde - Marquage lors de la synthèse par PCR Inconvénients - Nécessité

Kanamycine + apramycine Désoxystreptamines 4,6 bi-substituées ArmA ⇒ résistance à haut niveau à: amikacine, gentamicine, nétilmicine, tobramycine et fortimicine NpmA ⇒ résistance à : amikacine, gentamicine, nétilmicine, tobramycine et apramycine Plasmide pIP1204 de K. pneumoniae BM4536 IS6 mph mel armA sul1 ant3’’9 dfrXII IS6 aac3-II blaTEM1 blaCTX-M3 rep incL/M tra Défaut de pénétration Imperméabilité de la membrane cytoplasmique rôle de la chaîne respiratoire et des quinones

à l’autre) quelque chose qui est reconnu par le fimbriae qui permet a la bactérie de s’attacher fermement à des surfaces. Et on a des pilis pour la conjugaison, de type F, si on a un plasmide F, importantes pour établir le contact entre deux cellules. F pili spécifique pour plasmide F. Dans e cas de plasmide f, on a 1-4 pilis par cellules. Impliquée dans le processus en général de transfert D’ADN. Fimbriae sont beaucoup plus courts que les flagelles et beaucoup plus nombreux. Une cellule peut

Robert Koch en 1882. 1)Les bactéries Bactérie procaryote (sans noyau). 2 formes principales : Les bacilles (bâtons), les coques (rond). Fig 3 p255 Éléments constants chez toutes les bactéries Éléments inconstants *Membrane plasmique *Plasmide *Cytoplasme *Fimbrae *Appareil nucléaire *Flagelle *Paroi *Capsule *Ribosomes *Pili 2)Rôles des enveloppes dans le B.K Les mycobactéries entourées de 3 enveloppes: -Membrane plasmique -Paroi -Capsule La paroi du B;K est riche

variables (meme entre les individus d'une meme espèce, voire à des moments différents de la vie d'un meme individu) , les plasmides. En effet, alors que le chromosome se duplique de façon synchronisée avec la division cellulaire, les plasmides se repliquent de façon indépendante et sont répartis au hasard entre les deux cellules filles lors d'une division. De plus, certains plasmides ont la capacité de s'intégrer provisoirement au chromosome. Enfin, ces cellules ne contiennent pas de cytosquelette. Elles