Réaction en chaîne par polymérase

enquêtes policières, la quantité d'ADN prélevée qui permettrait d'identifier un suspect est parfois trop faible pour être analysée (quelques gouttes de sang, de sperme, etc.) Il faut donc amplifier cet ADN. Cela est possible grâce à la PCR (Polymerase Chain reaction), une technique basée sur la connaissance des mécanismes de réplication de l'ADN. Problématique : On recherche à comprendre quel mécanisme permet de doubler la quantité d'ADN de la cellule avant chaque division. Objectif

de code barre. Chaque personne possédant des chromosomes uniques le code barre ou empreinte génétique diffère d’un individu à l’autre. Les différentes techniques : La Méthode PCR (Réaction par polymérase) : La «Polymérase Chain Réaction» ou PCR (ou encore ACP pour Amplification en Chaîne par Polymérase), est une technique de réplication ciblée in vitro. Elle permet d'obtenir, à partir d'un échantillon complexe et peu abondant, d'importantes quantités d'un fragment d'ADN spécifique

Nomenclature IGM Les polymérases ADN polymérase IGM Les polymérases Activité exonucléase 3' 5' Activité exonucléase 5' 3' ADN polymérase IGM Les polymérases ADN polymérase I (E. coli) Activité exonucléase 5' 3' Activité exonucléase 3' 5' Taux d'erreur X 10-6 Fragment de Klenow (E. coli) ADN polymérase T4 ADN polymérase T7 (sequenase) ADN polymérase Taq (T. aquaticus) + + + + 10 + 285 9 40 5 Les ADN polymérases les plus fréquemment

l’utilisation d’une ADN polymerase thermorésistante permet d’obtenir, sans clonage, une amplification considérable d’un fragment donné d’ADN. Principe : La réaction PCR (Polymerase Chain Reaction) permet d'amplifier in vitro une région spécifique d'un acide nucléique donné afin d'en obtenir une quantité suffisante pour le détecter et l’étudier. Pour se faire, une série de réactions permettant la réplication d’une matrice d’ADN double brin est répétée en boucle. Ainsi, au cours de la réaction PCR, les produits

VITRO PCR La PCR ou Polymerase Chain Reaction (la réaction en chaîne par polymérase) est une technique qui permet d’amplifier l’ADN ou l’ARN in vitro. Elle a été développée par Kary Bank Mullis (prix Nobel de chimie en 1993). La PCR se base sur le principe suivant : • • • Connaître d’abord les fragments (20 nucléotides) qui encadrent la séquence d’ADN à amplifier. Synthèse de séquences complémentaires à ces fragments : ce sont les amorces oligonucléotidiques. L’ADN polymérase commence la synthèse

initiation complex to chain-elongating ribosome Chloramphenicol blocks the peptidyl transferase reaction on ribosomes Erythromycin blocks the translocation reaction on ribosomes Rifamycin blocks initiation of RNA chains by binding to RNA polymerase (prevents RNA synthesis) Acting on bacteria and eucaryotes Puromycin causes the premature release of nascent polypeptide chains by its addition to growing chain end Actinomycin D binds to DNA and blocks the movement of RNA polymerase (prevents RNA synthesis)

d’ARN ce qui différencie les monomères sont les différences au niveau de la base. Les polymères s’assemblent entre eux. Dans une cellule il y a 6pg d’ADN par cellule. Cette molécule mesure 1 mètre. C’est un enchainement de polymère pour former une chaine poly nucléotidique. Le nucléotide à 2 points d’accrochage (hydroxyle en 3 et le groupement phosphate en 5). Au niveau du carbone 3 on retrouve un groupement phosphate il y aura une liaison ester par le groupement phosphate du monomères d’en dessous

cations monovalents ou divalents; car les cations diminuent la répulsion des groupements phosphates. - Présence d'agents dénaturants (formamide) = compétiteur de liaisons hydrogènes - pH en milieu alcalin favorise la dénaturation 2.4 Hybridation Réaction qui conduit à l'appariement de 2 acides nucléiques simples brins d'origines différentes pour former une molécule d'ADN hybride (ou duplex). Paramètres importants pour l'hybridation: - Durée - Température d'hybridation (Tm-5°C) - Complémentarité des

Sélection de transformant ……………………………………………………… II. Isolement d’un mutant pif7 …………………………… 1) Introduction et rappels des lois de la génétique …………………………………… 2) Extraction d’ADN consiste à obtenir de l’ADN génomique ……………………… 3) Réaction en chaine par polymérase (PCR) ………………………………………… 4) Électrophorèses d’ADN sur gel d agarose …………………………………… 5) Résultats et interprétation …………………………………………………………. III. Conclusion ……………………………………………………. Annexe …………………………………………………………….. Sommaire annexes

fille, qui est complétée par une chaîne nouvellement synthétisée. I.2.2- Synthèse de la nouvelle chaîne dans le sens 5'-3' La synthèse de la nouvelle chaîne d'ADN est réalisée par une ADN polymérase, qui ajoute les nucléotides présents dans le milieu à l'extémité 3'OH d'un nucléotide correctement apparié. La synthèse se fait donc dans le sens 5'-3' : Il est nécessaire que la synthèse se fasse dans le sens 5'-3' : en effet, l'activité correctrice de la polymérase ne peut marcher que dans ce