Réaction en chaîne par polymérase

Voici la séquence d’une amorce (ou primer) : 5’ - TTTCTGCA- 3’ Où cette amorce se fixera-t-elle sur la séquence d’ADN ? Quelle séquence obtiendra-t-on après élongation par la DNA-polymérase ? 3’ -ACGTCTTT- 5’ 5’ ATACGGGATCCGAGCTCTCGATCGTCTGCAGAAATTCC 3’ En vert, site reconnu par l’amorce En turquoise, l’amorce La DNA polymerase permet l’ajout d’un dNTP (nucléotides triphosphates) à l’extrêmité hydroxyle en 3’ de l’ADN : 3’ TATGCCCTAGGCTCGAGAGCTAGCAGACGTCTTTAAGG 5’ 3’ TATGCCCTAGGCTCGAGAGCTAGCAGACGTCTTT-

le rôle de "ciseaux moléculaires". Les enzymes permettent donc la réalisation de réactions chimiques, ce qui leur permet de participer à la réalisation des phénotypes. Les enzymes partagent des propriétés communes, ce sont des protéines, elles ont donc une origine biologique, elles accélèrent énormément des réactions qui, seules, se déroulent à des vitesses très lentes, elles ne sont pas consommées dans la réaction et sont donc retrouvées intactes après la catalyse. Cette dernière caractéristique

un catalyseur jouant le rôle de catalyseur biologique. Une protéine est une chaine d’acide aminé. Un catalyseur biologique est une substance très efficace capable d’agir rapidement dans des conditions de milieux données. Les enzymes sont formé par un ensemble d’acides animés appelé structure primaire. Chaque ordre et disposition dans la structure primaire caractérise une enzyme. Une enzyme agit lors d’une réaction chimique sur un seul type de substrat : spécificité de substrat. Deux enzymes

constituée d’une ou plusieurs chaînes d’acides aminés : • Structure d’un acide aminé : [pic] Il existe 20 radicaux différents et donc 20 acides aminés différents. Les acides aminés se polymérisent en une ou plusieurs chaînes polypeptidiques grâce à une liaison peptidique (CO-NH). [pic] • Structure d’une protéine (doc 1 p26) : L’ordre d’enchaînement des acides aminés définit séquence des protéines appelée structure primaire. Le repliement de la chaîne grâce à des liaisons entre acides

digoxygénine par PCR (nptII) Pour réaliser la PCR, on a besoin du mélange réactionnel suivant : |Constituants du mélange |Concentration initiale |Concentration finale |Volume à prélever (µl) | |Tampon de réaction |10 X |1X |10 | |MgCl2 |25 mM |2.5 mM |10

eux-mêmes formés d’une molécule allongée, de masse 110 000 daltons, qui fournit par hydrolyse une vingtaine de sous-unités (protomères). En fait, il existe des protomères a et des protomères b, liés en dimères et assemblés avec jumelage d’une chaîne a et d’une chaîne b s’enroulant parallèlement en disposition hélicoïdale. Les tubulines, pratiquement identiques dans toutes les espèces, ont la propriété de fixer divers ligands: ions magnésium, colchicine et surtout GTP ou ATP, nucléotides riches en énergie

fait appel à l’hybridation. Western : détection d’une protéine, fait appel à la détection antigène – anticorps. La radioactivité est le marqueur le plus utilisé. Le précurseur le plus utilisé est le DNTP (actif en α). L’enzyme. Toutes les polymérases nécessitent une amorce et vont dans le sens 5’ 3’. On prend le brin en cours de copie et le sens de copie. L’enzyme de restriction. Ce sont des endonucléases (qui coupent l’ADN à l’intérieur, contrairement à l’exonucléase qui coupe à l’extérieur)

qui reproduit in vitro la réplication de l'ADN. À l'aide d'une ADN polymérase, de courts fragments d'ADN (amorces) et de nucléotides, la PCR permet de recopier en de nombreux exemplaires une région donnée de la molécule d'ADN. Ici, un fragment d'ADN de 100 nucléotides a subi 15 cycles de PCR. Trois types de molécules ont été obtenus. Une portion de séquence est représentée. Doc 6 Une expérience de PCR (Polymerase Chain Reaction). Des modifications spontanées de la molécule d'ADN se produisent

par les glucides. -En absence d'impuretés l'absorbance de la solution d’ADN à 320 nm doit être autour de zéro. Figure I.4 : Spectre d’absorption de l’ADN III: QUANTIFICATION DE L'ADN a. - Dosage colorimétrique de l'ADN Il est basé sur la réaction spécifique des 2-désoxypentoses avec la diphénylamine. En milieu acide à chaud, le 2-désoxyribose des nucléotides puriques peut être libérés et former un composé bleu dont le maximum d'absorption se situe à 595 nm. C’est la méthode classique pour

d’un désoxycytidylate E. Son promoteur est situé immédiatement en amont (en 5’) d’un désoxycytidylate QCM 8 : Indiquer parmi les propositions suivantes concernant l’ARNm de PYGL, celle(s) qui est (sont) exacte(s) : A. Il est synthétisé par l’ARN polymérase I B. Sa coiffe 7-méthylguanosine triphosphate est liée à un guanylate C. Il comprend une séquence 5’ non codante de 113 nucléotides (sans compter la coiffe Me-G-ppp-5’) D. Il comprend une séquence 3’ non codante plus courte que sa séquence 5’ non