Taq polymérase

centre de diagnostic prénatal pluridisciplinaire. RAPPELS : > PCR = Polymerase Chain Reaction → Permet d'obtenir un grand nombre de copie d'une région définie d'ADN 1) Dénaturation → 95°C pour que les 2 brins se sépare 2) Hybridation →T° hybridation 55-60° → Amorces de sondes qu'on a choisi (en fonction de la région qu'on veut) : on aura le double de la région qui nous interesse. 3) Elongation → 72° → TAQ polymerase qui se fixe sur l'amorce et qui complète en fonction du brin opposé pour

ambiante quelques minutes. De l’enzyme est ensuite mis dans le milieu. On laisse incuber quelques temps en utilisant un gradient de température. Lors de la PCR, nous utilisons le gène Nanog, un mélange de dNTP, du tampon pour la PCR, de la Taq polymerase, du dichlorure de magnésium, de l’ADN et de l’eau. Résultats • Pour le premier passage des feeders, nous avons eu 42 cellules / µL. • Pour la culture cellulaire afin d’avoir des colonies, nous sommes partis d’iPs que nous avons différencié

(protéines thermostables, enzymes de lessives à l'eau froide, par exemple) et un vaste champ d'études biologiques. Les protéines et enzymes extrêmes constituent un marché en plein essor (biotechnologie et industrie chimique). L'exemple le plus spectaculaire est la Taq polymérase provenant de Thermus aquaticus qui est largement employé pour les réactions de PCR. * L'apparition de la vie a peut-être eu lieu dans un environnement extrême. L'atmosphère primitive de l'époque, sans oxygène et sans ozone, laissait passer

transformant ……………………………………………………… II. Isolement d’un mutant pif7 …………………………… 1) Introduction et rappels des lois de la génétique …………………………………… 2) Extraction d’ADN consiste à obtenir de l’ADN génomique ……………………… 3) Réaction en chaine par polymérase (PCR) ………………………………………… 4) Électrophorèses d’ADN sur gel d agarose …………………………………… 5) Résultats et interprétation …………………………………………………………. III. Conclusion ……………………………………………………. Annexe …………………………………………………………….. Sommaire annexes Annexe 1 :

résistance AmpR et le promoteur de la RNA polymérase du phage SP6 qui provient de Salmonella. typhimurium immédiatement adjacent au polylinker. Ces types de plasmides offrent un avantage, car ils permettent de transcrire en ARN la séquence d’ADN qui a été insérée dans le polylinker. Les plasmides Gemini (1 à 4) dérivent des précédents. Ils possèdent en plus sur le brin complémentaire, de l’autre côté du polylinker, un promoteur de la RNA polymérase du phage T7. L’avantage de ces plasmides est

génome –correction. 1° PCR = reproduction d’un segment d’ADN choisi en plusieurs fois et de façon exponentielle. Amplification exponentielle d’un segment d’ADN spécifique, défini par deux amorces à chaque extrémité. On utilise pour cela la Taq polymérase qui fonctionne à de hautes températures ; on ajoute des bases de façon complémentaire à partir d’amorces toujours dans le sens 5’  3’. On a également besoin de dNTPs. La longueur de chaque segment d’ADN est définie par les amorces (une dans

n’est pas du gène multiplié. Cette opération est importante car si elle est mal faite, le résultat serra complètement loupé. Multiplication du gène La méthode la plus utilisée pour multiplier un gène d'intérêt est la méthode dite de la P.C.R. ( Polymerase Chain Reaction ). Elle s'effectue dans un appareil appelé thermocycleur. Cette méthode consiste en une multiplication exponentielle du fragment d'intérêt par un enchaînement de cycles ( généralement de 20 à 40 cycles ) comportant chacun 3 étapes :

Mélange réactionnel par réaction de PCR de 25µl: ___ µl d’ADN (100ng) ___ µl de tampon 5x ___ µl de MgCl2 25 mM (concentration finale de 1,5 mM) 0,5 µl de dNTPs (10mM, 2,5 mM pour chaque nucléotide) 0,5 µl de chacune des amorces à 150 ng/µl 1 µl de Taq polymérase (0,5U/µl) Compléter à 25µl avec de l’eau distillée stérile Si nécessaire (en fonction de la machine PCR utilisée), recouvrir d’huile minérale (environ 50µl). Programmer le PCR thermocycleur: 1 cycle : 30 cycles : 2 min 95°C 30 sec à 95°C 30 sec

besoins nutritionnels des bactéries et leur classification Thermophilus aquaticus is a species of bacterium that can tolerate high temperatures; it is the source of the heat-resistant enzyme Taq DNA Polymerase, one of the most important enzymes in molecular biology because of its use in the polymerase chain reaction. 5 http://fr.wikidoc.org/index.php/Bacteriumhttp://fr.wikidoc.org/index.php/Taq_polymerasehttp://fr.wikidoc.org/index.php/Taq_polymerasehttp://fr.wikidoc.org/index.php/Taq_polymerasehttp://fr

l’ADN sont des polymérases. Il y a des conséquences chimiques. Pour former un polymère on attache les monomères entre eux que sont les nucléotides. Elle utilise alors des nucléotides triphosphates. Notamment le : dATP, dGTP, dCTP, dTTP. Ce sont des dNTP. La libération de PPi (pyrophosphate inorganique) produit de l’énergie afin de former les liaisons phosphodiesters entre 2 nucléotides. L’ADN polymérase se fixe au niveau de la fourche de réplication. L’ADN polymérase est un dimère