Tryptophane

Exercice 2 : Etude de la croissance de Salmonella typhimurium en fonction du tryptophane On détermine le taux de croissance d’une souche S de Salmonella typhimurium dans un milieu minimum de culture additionné de solutions de tryptophane de concentrations croissantes. Les résultats expérimentaux après 18h de croissance à 37°C sont présentés dans le tableau suivant : Tube de culture Tryptophane (mg.L-1) μexpo (h-1) 1 0 0,00 2 6 0,01 3 9 0,22 4 12 0,70 5 15 1,20 6 18 1,60 7 21 2,05 8 24

mutante de Neurospora crassa, incapable de synthétiser le Tryptophane à partir du milieu minimum contenant du sucre, des sels minéraux, et une vitamine. J’observe que : - Dans le milieu minimum les souches 1, 2 et 3 N’ont pas de croissance. - Dans le milieu minimum+ de l’acide anthranilique seule la souche 1 croisse. - Dans le milieu minimum + de l’indole seule la souche 3 ne croisse pas. - Dans le milieu minimum + La tryptophane toutes les souches croissent. Donc lorsque le champignon

négatif contrôle positif Induction Activateur inactif contrôle négatif Molécule InduitRégulateur Etat natif lactose ARN pol Activateur + Répresseur Actif Activateur s Répression contrôle positif arabinose tryptophane leucine Activateur Act. non Inactif fonct. Répresseur Inactif Activateur Actif E. non- Effecteur Expression Inducteur inactive le Répr. inductible Inducteur active l'Activateur Co-répresseur active le Répres.

aussi être une source d'azote ainsi que les nitrates. 2.1)Mise en évidence de l'utilisation de l'urée par recherche de l'uréase: Principe : Cette recherche s'effectue sur milieu urée-indole . Ce milieu contient de l'urée, du tryptophane et un indicateur de pH, le rouge de phénol.C'est un milieu sans source de carbone et sans peptone Les bactéries qui produisent une uréase hydrolysent l'urée en carbonate d'ammonium, qui alcalinise le milieu. uréase urée

réaction dans un intérêt diagnostique, et sont donc les substrats des désaminases oxydatives recherchées en laboratoire : - le L-Tryptophane - la L-Phénylalanine - la L-Lysine NB : il existe des isomères L et D des aa. Mais dans les protéines, seuls les isomères L sont présents. 3.1.4.1. La Tryptophane Désaminase TDA  catalyse la désamination oxydative du tryptophane Doc 3a 3.1.4.2. La Phénylalanine Désaminase PDA  catalyse la désamination oxydative de la phénylalanine Doc 3b 3.1.4.3. La Lysine

basiques : Arginine : Arg, R Lysine : Lys, K Histidine : His, H Noyau guanidinium Noyau imidazole  Les acides aminés aromatique : Phénylalanine : Phe, F Tyrosine : Tyr, Y Tryptophane : Trp, W  Les acides aminés soufrés : Méthionine : Met, M Cystéine : Cys, C  L’iminoacide : Proline : Pro, P Quelques acides aminés particuliers : Histamine Dopamine Ornithine Citrulline

Folin-Cioccalteu), est ajouté. Il est composé d’un mélange de tungstate de sodium et de molybdate de sodium en solution dans de l’acide phosphorique et de l’acide chlorhydrique. Ce réactif permet la réduction des acides aminés aromatiques (tyrosine et tryptophane) conduisant à la formation d’un complexe coloré bleu foncé dont on mesurera l’absorbance entre 650 et 750 nm. Le protocole à suivre pour réaliser un dosage selon la méthode de Lowry est de mélanger la solution alcaline (solution de carbonate de

transforme en Indole qui se transforme en Tryptophane. Souche mutante 1 : j’observe que le champignon ne produit pas de filament en milieu minimum or je sais que les enzymes sont nécessaires à la production de Tryptophane j’en déduis qu’il manque la molécule d’enzyme 1.Souche mutante 2 : j’observe le champignon ne produit de filament en milieu minimum en milieu minimum acide anthranilique, or je sais que les enzymes sont nécessaires à la production de Tryptophane j’en déduis qu’il manque la molécule d’enzyme

phénol) + tryptophane. - Après une incubation de 18-24 h à 37° de la bactérie à étudier dans ce milieu, - Si présence d’une uréase  dégradation de l’urée en carbonate d’ammonium (HCO3-, NH4+) alcalin  virage du milieu vers le rouge Milieu à l’urée Ensemencer la bactérie à étudier Après 18 – 24 h d’incubation à 37° Soit Soit Uréase + Uréase - Ex: K. pneumoniae Ex: E. coli 2- Recherche du noyau indole: - Certaine bactéries sont capable de scinder la molécule de tryptophane selon la réaction

280 et 290 nm) à 420 nm (due aux pigments bruns (mélanoïdes) qui apparaissent lors de la réaction de Maillard mesure de la fluorescence du tryptophane, des produits de Maillard, de la pentosidine…. il existe un phénomène de quenching entre le tryptophane et les produits de Maillard lors des mesures globales (la longueur d’onde des émissions du tryptophane est celle de l’excitation des produits de Maillard…) mesure des capacités anti-oxydantes dosage d’autres composés spécifiques (cf infra)