Plasmide

Clonage de molécules d'ADN du phage l à l'aide de plasmides pBluescript et de bactéries Escherichia coli. Résumé Le clonage consiste à isoler un fragment d'ADN, l'introduire dans un vecteur et le reproduire en grand nombre. Cette technique permet de produire des molécules trop complexe à synthétiser par voie chimique et offre une alternative plus intéressante. Ici, par utilisation de plasmide pBluescript nous souhaitions obtenir plusieurs clones d'une molécule d'ADN. Pour se faire, grâce aux

des nitrates, qu’elles absorbent par la racine, pour synthétiser des protides et des alcaloïdes. Qu'est ce qu'un plasmide ? Un plasmide est un fragment d'ADN double brin, le plus souvent circulaire, que l'on retrouve dans le cytoplasme des bactéries ou des levures. Le plasmide n'est pas indispensable à la cellule hôte, mais il lui confère différentes propriétés. En effet, les plasmides sont porteurs de gènes utiles aux bactéries. Transmis par transfert horizontal, ces gènes codent pour des protéines

TP Séparation d’ADN par électrophorèse analytique et préparative I. But : Ce TP a pour but d’extraire l’ADN plasmidique pUC18-wzc à partir d’un culot d’E.coli, d’établir la carte de restriction du plasmide grâce à sa digestion par des enzymes et enfin d’isoler et purifier le fragment d’intérêt wzc dans pUC18-wzc. II. Principes : Pour mener à bien ce TP on utilise la technique d’électrophorèse sur gel d’agarose. Cette technique permettra la séparation des différents fragments obtenus par

elles consistent surtout en maladies, cancers, gale, et même rapidement la mort. Le plasmide, qui est une petite molécule circulaire d’ADN, est mobile et peut passer d’une cellule à une autre. Certains plasmides peuvent alors s’intégrer au génome de la cellule hôte. Cette forme de transfert d'ADN est observée pour les bactéries, notamment pour des gènes de résistance aux antibiotiques. L’intégration de plasmide bactérien au génome d'undomaine différent (eucaryotes ou archaea) est limité à des bactéries

vecteur de clonage. Les vecteurs de clonages sont des plasmides et possèdent tous des caractéristiques communes. Ils ont une origine de réplication qui leurs permet de se répliquer de manière autonome, un ou plusieurs gènes de résistance a un antibiotique pour la sélection des plasmide ayant intégrés le vecteur ou non, ainsi qu'une région possédant des sites de restrictions uniques pour différents enzymes de restrictions. La plasmide utilisé dans cette expérience est le pBlueScript, il possède

2 : Biologie moléculaire Principe, technique et applications 1.4 enzyme de restriction 1.4.1 1.4.2 1.4.3 1.4.4 1.4.5 Applications 1.4.5.1 Vecteurs Plasmide (ADN bactérien) pBR322 : vecteur de 4363 pb (très petite tailles) composé de 2 sites de restriction uniques situés dans les gènes de résistance (Amp, Tet). Figure 1 Plasmide bon vecteur car petite taille, 2 sites de résistance qui comprennent un seul site de de restriction chacun. 1.4.5.2 Carte de restrictions Une carte de restriction

son organisme d'origine.  2) La fabrication du plasmide : Les scientifiques doivent ensuite préparer un plasmide (voir illustration). On incorpore le gène d'intérêt préalablement récupéré dans ce dernier ainsi que deux autres gènes qui permettent de contrôler la transformation génétique; la plupart du temps, l'un sert à résister à un antibiotique A et l'autre à un herbicide. 3) L’incorporation du plasmide dans la bactérie :  Une fois que le plasmide est prêt, on l'insère dans la bactérie,en incorporant

Clonage d’un gène dans un plasmide Le clonage moléculaire est une des bases du génie génétique. Il consiste à insérer un fragment d'ADN (dénommé insert) dans un vecteur approprié comme un plasmide par exemple (voir exp4 pour une explication sur les plasmides). Le nouveau plasmide ainsi créé sera ensuite introduit dans une cellule hôte, en générale la bactérie Escherichia coli. Celle-ci sera alors sélectionnée et multipliée afin d’obtenir une grande quantité du plasmide d’intérêt. Cloner un gène

étape consiste à cloner le gène YFG dans un plasmide. Un plasmide est une petite molecule d'ADN circulaire qui se multiplie en même temps que les chromosomes. Pour obtenir de grandes quantités de ce plasmide celui-ci est tout d'abord introduit dans une bactérie -E. coli-(l'avantage d' E. Coli est qu'elle se multiplie très rapidement). Généralement un antibiotique est utilisé pour ne permettre la croissance que des bactéries qui ont reçu le plasmide (le plasmide porte un gène de resistance à l'antibiotique)

Saccharomyces cerevisiae, où ces molécules se maintiennent sous la forme de chromosomes artificiels (YAC ou Yeast Artificial Chromosomes). Pratiquement, le système consiste à lier in vitro un plasmide et des fragments d'ADN de mammifère et à transformer ces molécules d'ADN recombinant dans des levures. Le plasmide porte les unités fonctionnelles principales des chromosomes de levure (fig1) : -un centromère (CEN4) qu'on trouve sur chaque chromosome et qui assure une réplication stable et la précision