Plasmide

en introduisant le gène de la B galactosidase (une partie de l’opéron lac) 4-3-Lamda comme vecteur Ces propriétés du bactériophage ont permis de concevoir un nouveau vecteur à partir de [pic]capable de transporter plus d'ADN étranger que les plasmides pBR et pUC. La région b1 puisqu'elle n'est pas essentielle peut être remplacée par un fragment d'ADN d'une taille équivalente. On a alors un vecteur [pic]de remplacement de taille voisine de celle du génome naturel du bactériophage. On peut également

dans le vecteur (plasmide) pBluesscript 4 Phages: Virus pour bactérie Le bactériophage lambda est un virus d'E. coli 5 Phages: Virus pour bactérie 6 Génome du phage lambda Le phage lambda possède au niveau de sa tête un génome de sous forme d'ADN double brin linéaire de 48,5kb 7 Objectif du TP Cloner des morceaux de l’ADN du phage lambda dans le vecteur (plasmide) pBluesscript 8 Principe du TP Jour 1 HindIII EcoRI HindIII Vecteur (plasmide) EcoRI ADN génomique

o57 DATE: GROUPE de TD: 9 CLONAGE DE MORCEAUX D'ADN DU PHAGE LAMBDA Résumé: Lors de ce TP de BIO 57, nous allons réaliser des clones de morceaux d'ADN du phage Lambda. Pour cela on utilise des vecteurs de clonages (içi un plasmide pBluescript) combinés avec notre ADN à cloner, on a donc des molécules recombinantes ,ou ADNrecombinants (vecteur + ADN lambda). Ensuite on les introduit dans des bactéries hôtes afin de les reproduire. Au final on obtient des clones d'ADN lambda avec son

fragment d’ADN bactérien situé à l’extérieur et sur certains éléments mobiles du chromosome, tels les plasmides. Cette forme de résistance est transférable d’une bactérie à l’autre et même à des bactéries d’espèces différentes. Le transfert d’un seul plasmide augmente aussi le risque d’une résistance à plusieurs médicaments. Par exemple, le Shigella, responsable de la diarrhée, peut transférer un plasmide avec résistance à quatre ou cinq antibiotiques différents. Mécanismes de résistance Brouillage

biologie moléculaire qui Le clonage consiste à insérer un segment d'ADN étranger dans une petite molécule capable de se répliquer de façon autonome. Ce type de molécule d'ADN est appelé un vecteur de clonage. Un vecteur de clonage courant est le plasmide bactérien. Il existe 2 types de clonage :le clonage directionnel qui consiste à insérer le fragment dans un sens et le clonage non orienté qui consiste a inséré dans le fragment dans les 2 sesns. II -En pratique : 2 . Amplification in vitro du

Résumé Durant ce TP, des molécules d'ADN ont été clonées, c'est-à-dire que leur quantité a été amplifiée. Ce clonage a été réalisé par transformation bactérienne à partir de plasmide Blue Script et de phage lambda digérés par des enzymes de restriction. A l'issue de cette manipulation ont été obtenus des plasmides transformés et recombinés. II/ Introduction Le but du clonage est de produire de grandes quantités d'ADN à partir d'un fragment donné. Ainsi une petite quantité d'une molécule

étape consiste à cloner le gène YFG dans un plasmide. Un plasmide est une petite molécule d'ADN circulaire qui se multiplie en même temps que les chromosomes. Pour obtenir de grandes quantités de ce plasmide celui-ci est tout d'abord introduit dans une bactérie -E. coli-(l'avantage d' E. coli est qu'elle se multiplie très rapidement). Généralement un antibiotique est utilisé pour ne permettre la croissance que des bactéries qui ont reçu le plasmide (le plasmide porte un gène de résistance à l'antibiotique)

Génétique et Biologie Moléculaire Elément 2: Biologie Moléculaire TD N°1:TECHNIQUES DE SEPARATION ET D’ANALYSE DES ACIDES NUCLÉIQUES: ADN, ARN & PLASMIDES 2 TD1.TECHNIQUES DE SEPARATION ET D’ANALYSE DES ACIDES NUCLÉIQUES 1.Purification des acides nucléiques 1.1.Extraction des ADN 1.2.Extraction des ARN 1.3.Extraction des 1.3.1. Rappel sur les plasmides plasmides 1.3.2. Purification par Lyse alcaline 1.3.3. Purification par Gradient de chlorure de césium 2.Séparation des acides nucléiques 2.1.Electrophorèse

fragments d'ADN par des appariements de hases complémentaires. Les fragments d'ADN ainsi réunis peuvent être liés de façon covalente au cours d'une réaction très efficace catalysée par t'ADN ligase. Dans cet exemple, une molécule d'ADN recombinant de plasmide contenant une insertion d'ADN chromosomique est formée. Par exemple, un fragment d'ADN contenant un gène humain peut être relié au chromosome d'un virus bactérien en tube à essai. La nouvelle molécule d'ADN recombinante peut ensuite être introduite

a. Préparation de l’ADN plasmidique b. Les plasmides c. La culture cellulaire d. Les vecteurs lentiviraux e. Le gène d’intérêt f. Les enzymes de restriction V. Méthodes p9 a. Transformation b. Transfection c. Digestion d’un plasmide d. Titration par cytométrie de flux VI. Résultats p13 a. Amplification d’un plasmide b. Amélioration de la production de vecteur lentiviraux