Cinétique Enzymatique Hétérogène

Exercice 1 Exercice enzymologie Pour l’étude d’une poudre A possédant une activité enzymatique, on en dissout 0,1 g dans une solution tampon convenable et on complète à 10 ml, on obtient ainsi la solution B. Les mesures d’activités enzymatiques sont effectuées après dilution de 1 ml de solution B dans 9 ml de solution de substrat (S). La concentration en substrat dans le milieu réactionnel est de 10 Km (Km = 1 mmol.L-1) [P] (µmol.L-1) 10 5ème année de Pharmacie 2010-2011 K. CHIKH 8 6 4 2 0 2

Enzymologie Introduction : Nature biochimique : Protéine Rôle : = biocatalyseur ( accélération de la vitesse d'une réaction) La catalyse enzymatique : 1.1 Définition : Catalyseur : -Augmente la vitesse de la réaction -Se retrouve intact à la fin de la réaction -Agit à très faible dose -"Réutilisable" -Ne modifie jamais le sens de la réaction -Ne change pas la constante d'équilibre L'enzyme diminue l'énergie d'activation d'une réaction 1.2 Caractéristique générales -Une enzyme réagit sur une seul

sur le modèle suivant : Nom du substrat ------------ type de réaction ------------------- ase Ex : glycogène synthétase est l’enzyme qui synthétise du glycogène B – Mode d’action des enzymes 1 – La cinétique enzymatique On peut suivre une réaction de catalyse enzymatique dans le temps en dosant : • Soit la quantité de substrat transformée S • Soit la quantité de produit formée P La mesure de la vitesse de la réaction (quantité de substrat transformé ou de produit formé

universite de limoges | TRAVAUX PRATIQUES UE ENZYMOLOGIE | Faculté des Sciences et Techniques, L3 BBMCG | | Claire Carpenet;Guillaume Kerbiquet;Pierre Peynichou | 02/05/2011 | Etude cinétique d’une enzyme multimérique : l’uréase. | uréase uréase L’uréase est une enzyme catalysant l’hydrolyse de l’urée (CH4N2O) en ammoniac (NH3) et dioxyde de carbone (CO2) par la réaction suivante : NH2-CO-NH2 + H2O CO2 + 2NH3 En 1926, James Summer

réactions doivent se passer dans des conditions douces, c'est-à-dire à la température de l'organisme qui correspond à une isothermie tempérée, dans une étroite frange de pH et en milieu de force ionique généralement faible. II°) La réaction enzymatique: Ces réactions ne peuvent se produire qu'en présence de catalyseurs biologiques, les enzymes. Un catalyseur est une substance qui accélère la vitesse d'une réaction chimique mais qui n'est ni consommée ni transformée par la réaction. Pour réaliser

vue qu’un déficit enzymatique peut avoir de grandes conséquences. Ex Phénylcétonurie (PAH) ou plus simplement les groupes sanguins. Chaque enzyme a un rôle bien précis et chaque cellule possède un équipement enzymatique qui lui est propre. Cet équipement doit permettre de réaliser toute les réactions nécessaires à sont métabolisme mais aussi à sa fonction. Toute les cellules possèdent des enzymes actives dans leur métabolisme, elles auront donc un équipement enzymatique commun seulement en

iii Introduction 1 Matériel et Méthodes 5 Résulats 9 Observations microscopiques des fractions 9 Fractionnement cellulaire, matériel biologique et dosage protéique des fractions 10 Cinétique enzymatique 11 Gel d’électrophorèse 14 Discussion 16 CONCLUSION 20 Références 21 Annexe 1 : CINÉTIQUE ENZYMATIQUE : EXEMPLE DE CALCUL POUR L’EXTRAPOLATION POUR LES DONNÉES DE vmax, km et ki AVEC LE GRAPHIQUE 2 (P.12) 18 Table des tableaux et des figures Tableau I : Dosage des échantillons de fractions

une réaction enzymatique : pour transporter un substrat ; pour accepter un produit ; comme participant à la structure de l’enzyme. Ions (exemple : atome de zinc de l’anhydrase carbonique) ou petites molécules minérales (exemple : H2O, milieux biologiques) Certains cofacteurs = molécules + complexes synthétisés par la cellule = coenzymes Coenzyme : molécule biologique (synthèse uniquement dans les cellules vivantes) intervenant comme cofacteur indispensable dans la catalyse enzymatique d’une réaction

initiales, la vitesse d’une réaction enzymatique est constante est s’appelle la vitesse initiale. b. Partie AB La courbe s’incurve. Dans cette partie, la vitesse de réaction diminue. c. Partie BC La courbe est parallèle à l’axe des abscisses. La concentration en produit n’évolue plus en fonction du temps : la vitesse de réaction est nulle. 1.2.3. Détermination de la vitesse initiale De manière générale, la détermination des vitesses d’une réaction enzymatique se fait dans les conditions initiales

biochimiques. Partie enzymologie Définir les termes d'enzymologie : enzyme, substrat, produit, coenzyme, activateur, inhibiteur, réaction enzymatique, propriétés et classification des enzymes (nomenclature). Rappeler la cinétique chimique, en terme de notion d'ordre d'une réaction, réactions élémentaires et complexes formées. Etudier la vitesse d'une réaction enzymatique en fonction du temps, de la concentration d'enzyme, de la concentration du substrat, en représentation graphique normale ou en double