Électrophorèse sur gel d'agarose

étape de dénaturation à 94°C pendant 5 s, une étape d’hybridation à 59°C pendant 10 s et une étape d’élongation à 72°C pendant 10 s, et enfin une étape d’élongation finale à 72°C pendant 5 mn. La révélation des produits d’amplification sur un gel d’agarose à 1,5 % a permis de déterminer le groupe phylogénétique en fonction de la présence ou non des 3 fragments d’ADN amplifiés. e- Typage moléculaire des souches Le typage moléculaire des souches d’E. coli a été réalisé par PCR en utilisant

fragments, puis ligation des fragments au vecteur de clonage choisi, ici généralement un dérivé du phage lambda. Cette étape est généralement effectuée sur gel ou par centrifugation sur un gradient de densité de sucrose ou de sel (NaCl). Alternativement, l’ADN peut être isolé sur gel. La fraction désirée est alors découpée et l’ADN est isolé directement du gel. Le but est de sélectionner la fraction d'ADN dont la taille des fragments sera optimale pour le clonage. (4) Encapsidation des phages recombinants

corticaux de rats grâce à son activation par CREB (Yang et al, 2010). Test des comètes : Ce test consiste, après avoir lysé les cellules et soumis l’ADN marqué à un traitement dénaturant à détecter les lésions subies par électrophorèse sur gel d’agarose. En effet après cette électrophorèse, lorsque l’ADN est intact on observe une sphère (noyau) bien délimitée tandis que des lésions seront caractérisées par une trainée partant de la sphère rappelant la forme d’une comète. Dans un premier temps, les auteurs

l'électrophorèse de zone - Description des techniques sur différents supports - Conditions d'appareillage - Principales applications en Biochimie Clinique. 1.5.2 Développements récents (focalisation isoélectrique, isotachophorèse, transferts, électrophorèse capillaires, etc.) - Principales applications en Biochimie Clinique. 1.6 Méthodes chromatographiques 1.6.1 Chromatographie d'adsorption et de partage (colonne, couche mince) Principes - Conditions d'appareillage - Principales applications en Biochimie

bactérie et diluer les composants alimentaires. En effet, de nombreux composants alimentaires inhibent la Taq polymérase. Les étapes de préparation de l’échantillon, l’amplification génique elle-même, la détection des amplicons par électrophorèse en gel d’agarose prennent au moins un jour. Ainsi, la méthode nécessite en moyenne deux, trois jours pour sa réalisation, ce qui limite considérablement l’avantage lié à la très haute sensibilité de la PCR. D’autre part, la détection des amplicons

............................................................................................... 29 7.2 Préparation des échantillons .................................................................................................. 29 7.3 Dépôt sur gel ........................................................................................................................... 30 7.4 Transfert sur membrane ..............................................................................................

gène dans le mélange de fragments. Lorsque l’ADN est fragmenté, on utilise la technique du Southern Blot pour repérer le gène. Cette méthode consiste à séparer les fragments obtenus par électrophorèse en gels d’agarose puis à dénaturer l’ADN (séparation des deux brins de la double hélice) par immersion du gel dans une solution alcaline. Il faut ensuite fabriquer une sonde fluorescente ou radioactive complémentaire du gène d’intérêt et  la laisser s’hybrider avec la partie du brin d’ADN du gène

disposent de 300 enzymes de restrictions. On peut procédé en espérant les acides nucléiques. Ceci c’est développé en 1970 c’est l’électrophorèse où on fait migrer les molécules d’ADN sur un support avec un champs électrique. Ce support est un gel c’est le gel d’agarose (algue) mais aussi le polyacrylamide qui est synthétique. Les molécules d’ADN vont du - vers le + car on travaille a pH = 8 à 8,5 et les groupements phosphates sont ionisés. Les grosses molécules migrent moins que les petites. L’agarose

liquide basse pression - Matériel pour chromatographie sur couche mince - Système de chromatographie en phase gazeuse - Systèmes de chromatographie liquide à haute performance (HPLC) et détecteurs associés - Appareillages et matériels pour électrophorèse sur gel - Modes opératoires - Temps imparti - Equipements de protection individuelle et collective - Valeurs et documents de référence - Echantillons biologiques - Kit chromatographique pour l’extraction d’acides nucléiques - Thermocycleur - Appareillage

CHROMATOGRAPHIE D’EXCLUSION STÉRIQUE 7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 Principe de la chromatographie d’exclusion stérique (CES) Phases stationnaires et phases mobiles Traitement du chromatogramme Instrumentation Domaines d’application EXERCICES CHAPITRE 8 • ÉLECTROPHORÈSE CAPILLAIRE ET ÉLECTROCHROMATOGRAPHIE 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 De l’électrophorèse de zone à l’électrophorèse capillaire Mobilité électrophorétique et flux électro-osmotique Instrumentation Techniques électrophorétiques Performances Électrochromatographie