Électrophorèse sur gel d'agarose

entière les régions répétitives, non codantes, qu’on veut examiner : ces régions contiennent des successions de bases (A, C, G et T) caractéristiques de chaque individu. Les fragments d’ADN sont introduits à l’une des extrémités d’une plaque de gel. 5. Le gel ne manipule pas facilement. Les fragments sont donc transférés sur une membrane de nylon, sans altération de la séquence. Puis les deux bruns des fragments de la double hélice d’ADN sont séparés. 6. La membrane de nylon est mise dans une solution

1 ADN RECOMBINANT I. TECHNIQUES D’ÉTUDE DE L’ADN 1. Purification de l’ADN 1. Caractéristique de l’ADN L’Adn est en double hélice, il possède 10 nt/ tour d’hélice , 3,4nm/tour Le génome d’E. Coli possède un seul chr soit environ 4.10⁶ paires de bases ( pb ) La taille disproportionnée de la molécule d’Adn entraîne une grande sensibilité aux cassures mécanique lors de l’extraction. Étapes : Lyse des cellules Traitements chimiques, enzymatiques et physiques    Centrifugation 1. Pour la lyse

dans l’effet transcriptionnel de l’hormone. D. La boîte b est essentielle à l’activité du promoteur. E. La boîte b pourrait être la boîte TATA. 5ème question : Cette question est associée aux questions 3 et 4. La technique de retard sur gel permet d’étudier les interactions entre ADN et protéines et, en particulier, entre les facteurs de transcription et les éléments en cis présents dans les promoteurs des gènes. Des oligodésoxynucléotides double brin mesurant généralement moins de 30

lit l’ADN matrice et poursuit l’élongation des amorces en ajoutant les nucléotides dans l’ordre où ils peuvent s’apparier à leurs complémentaires sur l’ADN matrice. Et tous le processus se répète. VERIFICATION DES PRODUITS PCR Électrophorèse sur gel d’agarose des produits PCR 1 2 3 4 5 6 7 8 1114 900 692 501 404 320 242 3.Problèmes pratiques-optimisation 1- Choix des amorces ou primers 2- La température d’hybridation des amorces 3- La nature de la polymérase

activités enzymatique. les analyses sanguines : les analyse effectuer sur le sang permettre de dressé un profile métabolique servant de base a un thérapeutique les plus courante sont : le dosage du glucoses ,bilan électrolytique , dosage pp est électrophorèse ( quali et quanti) dosage de luré, , dosage triglycéride, et du cholestérol (on va doser le LDL et HDL ) mesure des activités enzymatique sanguine on va dosé les transaminase les phosphatase alpha amylase. Chapitre 3 préparation

Déterminer sa masse moléculaire à l'aide du graphique précédent. Existe t'il une autre méthode pour déterminer la MM ? Correction exercice 1 : 1 - Cet exercice met en jeu une chromatographie d'exclusion (encore appelée : tamisage moléculaire, gel filtration, perméation de gel). La connaissance du débit de la colonne (5 ml / min) et des différents temps de rétention nous permet de calculer le volume d'élution pour chaque composé (voir tableau), selon la relation : Ve (volume d'élution) = d (débit) x tr (temps

permet d'augmenter la densité des produits de PCR. Ainsi lors du dépôt, les produits de PCR tomberont au fond des puits et remplaceront alors les tampons. Une fois le programme de PCR terminé, nous ferons migrer nos produits de PCR par électrophorèse sur gel d'agarose 4%. L'agarose permet de créer un réseau maillé permettant une séparation des produits de PCR. Les fragments les plus légers migreront le plus loin. Le pourcentage élevé de 4% pour l'agarose permet une haute résolution (réseau maillé plus

54 2. Conditions d’expression................................................................................. 55 3. Techniques de biochimie...................................................................................... 57 A. Electrophorèse de protéines sur gel de polyacrylamide..................................... 57 1. Préparation des échantillons protéiques......................................................... 57 2. Préparation des gels de polyacrylamide et conditions de migration...

extractions, il faut éviter toute contamination. Ainsi, chaque étape de la PCR se réalise dans des salles différentes : préparation de la PCR (tampon, TAQ polymérases, amorces…), ajout de l’ADN préalablement décongelé, centrifugation, électrophorèse sur gel d'agarose (annexe n°3), thermocycleur, bain de BET (Bromure d'éthidium, un intercalant de l’ADN) puis lecture de l l'ADN dans un machine à UV. Pour finir, l'ADN est envoyé dans un centre de séquençage. Les résultats sont restitués au CBGP

fixés avec une ADN ligase qui attache les chaînes sucre-phosphate ensemble en faisant une liaison phosphodiester. On peut ainsi construire des molécules d'ADN. Electrophorèse d'ADN sur gel d'agarose C'est une méthode d'analyse et/ou de purification de l'ADN : des échantillons d'ADN sont mis déposés dans un gel d'agarose immergé dans un tampon (TAE ou TBE) et mis à migrer sous l'effet d'un champ électrique (l'ADN est un polyanion). L'ADN est visualisé en ajoutant du bromure d'éthiduim (très