Électrophorèse sur gel d'agarose

les dNTPs sont en quantité limitantes. La phase de plateau est obtenue lorsque tous les dNTPs est les amorces sont utilisées. Ce sont les deux phases de la PCR : la phase exponentielle et la phase de plateau. Electrophorèse de l’ADN. Elle se fait sur un gel d’acrylamide ou d’agarose. La migration est seulement influencée par la taille et on utilise cette technique pour de l’ADN double brin linéaire. Un ADN circulaire peut avoir de multiples formes, il peut être relâché ou avec des supertours

(QSépharose)----------------------------------------------------------------- P17 II.1.D. Purification par chromatographie d’affinité (héparine sépharose)----------------------------------------------------------------- P19 2 II.2. Analyse par électrophorèse SDS-PAG --------- P21 II.3.Analyse par Western-Blot----------------------------- P27 IIIRésultats / Discussion------------------------------------ P30 III.1. Purification de l’OVAX à partir du blanc d’œuf--------------------------------------------------------------------

Dénaturation à 95°C, 1 à 2 min Hybridation des amorces à 50-55°C, 1 à 2 min Extension des amorces à 72°C, 2 à 3 min Au bout de 30cycles -> taux d’amplification théorique de 109 Détection du fragment amplifié : visualisation directe après électrophorèse en gel d’agarose et par hybridation avec une sonde d’ acide nucléique Sensibilité : Détection d’un micro-organisme présent dans un échantillon dans un délai de quelques heures Problèmes : Contamination éventuelles en cours de manipulation. Pas de différence

115 II.4 Les électrophorèses. ............................................................................................... 116 II.4.1 L’électrophorèse sur gel d’agarose. ............................................................... 116 II.4.2 L’électrophorèse sur gel d’acrylamide à gradient dénaturant (DGGE). ........ 118 II.4.3 L’électrophorèse en champ pulsé (ECP). ....................................................... 119 II.4.4 La comparaison des profils des électrophorèses. ...........

Techniques 3.1. Electrophorèse Technique qui permet d'observer l'ADN: On a un gel d'agarose ou de polyacrylamide. L'ADN va migrer en fonction de la charge: du pôle négatif au pôle positif (l'ADN étant chargé négativement). Si un ADN fait 1000 pb, il va migrer moins loin (et plus lentement) qu'un ADN qui fait 700 pb. NB: C'est la charge qui fait migrer l'ADN; mais la migration s'effectue en fonction du poids de la molécule d'ADN. 8 3.2. Séquençage de l'ADN Hybridation et électrophorèse sont les 2 concepts

β-D-Fructosidase 0,5 β-D-Glucosidase 0,5 α−D-Glucosidase 0,5 β-D-Galactosidase 0,5 Agiter les tubes. Laisser agir 30 minutes au bain-marie à 38 °C. 3.2. Identification des oses libérés Elle est réalisée chromatographiquement sur une plaque de gel de silice qui a été préalablement imprégnée de Na2HPO4 0,2 mol.L-1, puis activée à 110 °C pendant 20 minutes. A l'aide de capillaires déposer les sucres témoins : 10 dépôts successifs de D-Glc, 10 dépôts successifs de D-Gal, et 15 dépôts successifs

PHAGES, COSMIDES, YAC, BAC, VIRUS 13 I- Les vecteurs en génie génétique : l'ADN plasmidique II- L'ADN phagique III. Cosmides, YAC et BAC 13 17 20 Chapitre III: ENZYME DE RESTRICTION, ÉLECTROPHORÈSE, CARTE DE RESTRICTION 24 I. Enzymes de restriction II. L’électrophorèse sur gel III. Les enzymes utiles en génie génétique: 24 30 31 CHAPITRE IV: CLONAGE ET ÉTUDE DE L’ADN CLONÉ. I - Le clonage II - Les banques génomiques III - Les banques de cADN IV - L’étude de l’ADN

spécifique par clonage de l'ADN dans une bactérie. Remarques : de nombreuses techniques peuvent être utilisées pour vérifier que le gène cloné dans un vecteur correspond à un gène d'intérêt : séquençage d'ADN, contrôle de taille par électrophorèse sur gel d'agarose, etc... 1. 2. Préparation d'une banque d'ADN à partir d'ARNm : banque d'ADNc. Le clivage de la totalité du génome d'une cellule avec une nucléase de restriction spécifique pour le clonage d'un gène est parfois qualifié de pêche à la

sodium nous as permis de voir que notre chromatographie a bien fonctionnée puisqu’on retrouve uniquement de l’arginine dans l’éluat 2 qui correspond à la seconde élution. Nous aurions pu également séparer ces deux acides aminés par électrophorèse sur gel d’agarose ou de polyacrylamide puisque l’électrophorèse sépare en fonction de la taille et la charge des molécules. Or l’alanine et l’arginine on une taille et une charge différente.

prévention sera systématiquement intégrée à la réflexion. 6 6 6 6 Groupe d'experts de biotechnologies h Quantifier des biomolécules par volumétrie i Quantifier des biomolécules par spectrophotométrie. j Séparer des biomolécules par électrophorèse sur gel d’agarose ; k Séparer des biomolécules par chromatographie sur couche mince et sur colonne. l Utiliser les logiciels informatiques pour traiter les données expérimentales. m Exploiter les ressources numériques et les outils informatiques. limites