Électrophorèse sur gel d'agarose

complètement par une enzyme de restriction qui génère des extrémités droites. On isole des fragments de plus de >200 kb par électrophorèse en champs alternés. Ces fragments récupérés dans des blocs d'agarose sont liés aux bras du vecteur qui sont traités à la phosphatase alcaline pour empêcher leur religation. Cette ligation a lieu après avoir fait fondre les blocs d'agarose à 68°C, puis avoir refroidi la solution à 37°C. Les produits de ligation sont ensuite transformés dans des levures avec

Isolement d’un mutant pif7 …………………………… 1) Introduction et rappels des lois de la génétique …………………………………… 2) Extraction d’ADN consiste à obtenir de l’ADN génomique ……………………… 3) Réaction en chaine par polymérase (PCR) ………………………………………… 4) Électrophorèses d’ADN sur gel d agarose …………………………………… 5) Résultats et interprétation …………………………………………………………. III. Conclusion ……………………………………………………. Annexe …………………………………………………………….. Sommaire annexes Annexe 1 : organigramme………………………………………………………………………………..

by centrifugation through a QIAshredder spin column. Buffering conditions are adjusted, precipitating proteins and polysaccharides, and the lysate is loaded onto the DNeasy Plant spin column. During a brief spin, DNA selectively binds to the silica-gel membrane while contaminants pass through. Remaining contaminants and enzyme inhibitors are removed in one or two efficient wash steps. Pure DNA is then eluted in water or low-salt buffer, ready for use. Avant de commencer : - Préchauffer un bloc chauffant

nucléotides sont normalement appairés A la fin de la réaction en chaine, les fragments d’ADN de différentes tailles sont formés a travers tout les tubes à essai. Le Gel Polyacrylamide Electrophorèse est utiliser pour séquencer l’ADN, on dispose le contenu des 4 tubes a essai( 1 de Guanine, 1 de Adénine ect…) en haut de la plaque de gel, dans la quelle on vas faire passer un courant L’ADN vas se déplacer du pole négatif(en haut) jusqu’au pôle positif ( en bas ), à cause de la charge négative transmise

contenant le plasmide est ensuite possible : il s'agit pour cela de les cultiver au sein d'un milieu contenant l'antibiotique auquel elles sont résistantes grâce au gène apporté par le plasmide. III/ Les résultats A. Digestion enzymatique et électrophorèse Les enzymes de restriction sont des enzymes capables de couper un fragment d'ADN au niveau d'une séquence de nucléotides particulière appelée site de restriction. Chaque enzyme de restriction reconnait un site de coupure particulier, au niveau

de l'extraction Analyse sur gel d'agarose révélée au bromure d'éthidium * Par électrophorèse sur gel d'agarose, on peut analyser la présence et la taille des acides nucléiques contenus dans la préparation. Ceux-ci sont révélés par le bromure d'éthidium, un colorant dont la fluorescence augmente très sensiblement quand il interagit avec l'ADN. Dans le cas d'une préparation d'ADN plasmidique, on observe sous UV une ou plusieurs bandes colorées discretes dans le gel, correspondant à l'ADN du plasmide

la même enzyme de restriction ou une enzyme qui donne des extrémités compatibles. 2. Purification et extraction de l’ADN Deux techniques sont utilisés pour extraire te purifier le produit de PCR et le plasmide. L'ADN sera déposé sur le gel d'agarose à 1% et extrait par freeze-queeze (congélation dans l'azot e liquide puis centrifugation durant 15min à 10000g,L'ADN et ensuite purifié et extrait par une solution phénol/chloroforme/alcool isoamylique aprés centrifugation pendant 10min puis 5

LES TECHNIQUES LIEES AUX ACIDES NUCLEIQUES Sommaire Préparation des acides nucléiques Extraction/Purification Les enzymes agissant sur les acides nucléiques Dosage et conservation Synthèse in vitro Séparation des acides nucléiques Electrophorèse Ultracentrifugation Détection, caractérisation et identification des acides nucléique Marquage et suivi des acides nucléiques Marquage radioactif Marquages froids : colorimétrie, fluorescence ; chimioluminescence ; Hybridation moléculaire

a été isolée sur milieu gélosé additionné de Tétracycline et d’Ampicilline. De ce milieu, les cellules d’E.coli ayant intégré le plasmide recombinant ont été sélectionnées par vérification de la présence de ce plasmide à l’aide d’une électrophorèse sur gel d’agarose (Cf. Image 1). Les pistes des colonies n° 1, 2 et 4 montrent la présence du plasmide par un spot de migration. Elles seront donc utilisées pour la surproduction de l’AAL et ensuite sa purification. II Surproduction de l’AAL et obtention

nuggets des marques A et D à Les nuggets de ces deux marques comportent de la dinde. Ils ne sont donc pas 100% poulet !!! Manipulations réalisées Seconde manipulation : détection de traces de viande de dinde dans les nuggets de poulet par PCR + électrophorèse d’ADN à Consiste à détecter des traces d’ADN de dinde dans les nuggets Etape 1 : Extraction de l’ADN à partir de broyat de nuggets à Objectif : isoler l’ADN des autres constituants du nuggets (protéines, lipides, glucides…) Broyage Extrait soluble