Électrophorèse sur gel d'agarose

relève tous les indices susceptibles de faire avancer l’enquète. Grâce à des études ballistiques, ils déterminent d’où la balle a été tirée et la taille du tireur (indice n°1). Sur un autre mur, une giclée de sang est visible. L’étude de ce sang (électrophorèse d’hémoglobines) indique que la personne blessée est atteinte de la drépanocytose (indice n°2). Madame A. n’étant pas atteinte de cette maladie, une autre personne a donc été blessée. Les enquêteurs relèvent les empreintes digitales dans l’appartement

adultes (I-2), (II-1 et 3) ou de cellules prélevées par amniocentèse chez le fœtus (III-1). – L’ADN est ensuite traité par l’enzyme de restriction Hae III et les fragments obtenus sont soumis à une électrophorèse sur gel d’agarose. – Après dénaturation de l’ADN, on transfère une empreinte (blot) du gel sur un filtre de nitrocellulose (la position des fragments d’ADN est respectée au cours de ce transfert). – Le filtre est immergé dans une solution contenant une sonde moléculaire radioactive d’ADN

mise en œuvre expérimentale vous paraît-elle adaptée ? Les indications fournies sur la bouteille d'acide sulfurique sont : d = 1,83 ; pureté = 95 % (p/v); MM = 98 g.mol-1. 5 Exercice 4 : Préparer 60 mL d’agarose 1 % p/v dans du tampon de migration. Pour cela, vous disposez d’agarose en poudre et de tampon de migration concentré 10 fois. Comment allez-vous procéder ? Exercice 5 : Exprimer en molarité les concentrations des solutions suivantes : 1) Glucose (MM =180 g.mol-1) à 18% (p/v) 2) NaCl

espèce Séparation : cations, puis neutres puis anions Exemple : séparation ADN et ARN par électrophorèse en gel d’agarose Gel d’agarose = polymère à base d’agar-agar purifié (viscosité variable selon dilution) Digestion par enzymes de restriction (protéine pouvant couper un fragment d’ADN) Séparation en fragments de différentes longueurs Exemple : séparation ADN et ARN par électrophorèse en gel d’agarose Acides nucléiques chargés négativement donc ici effet de masse Marquage de l’acide

séquence recherchée ESR1 • Elongation grâce à l’action de ADN Polymérase (mix Go Taq). Figure 5 : Amplification PCR La technique de l'électrophorèse sur gel d'agarose est basée sur la séparation des acides nucléiques chargés négativement sous l'effet d'un champ électrique. Cette séparation s'effectue à travers la matrice du gel d'agarose : (les molécules de plus petites tailles se déplacent plus rapidement et migreront plus loin que les molécules de tailles supérieures). Les échantillons sont

complémentaires d’ADN sont synthétisés à partir des extrémités 3’OH libre des amorces hybridées. Électrophorèse L’électrophorèse sur gel d’agarose est une des plus communément utilisées car elle permet de séparer des molécules en fonction de leur taille. La méthode de l'électrophorèse est basée sur le déplacement d'ion (molécule ayant perdu leur neutralité électrique) à travers un gel de polymères, sous l'effet d'un champ électrique. En milieu basique, les fragments d’ADN sont chargés

plasmide furent digérés. Par l'emploi de ligase, nous pouvions effectuer la ligation des fragments d'ADN aux plasmides. Après transformation et culture des bactéries dans des boites de Pétri, les clones sélectionnés ont été analysé par électrophorèse sur gel d'agarose afin de vérifier la qualité des solutions de plasmides recombinés. Introduction L’acide désoxyribonucléique, ou ADN, est une molécule, présente dans toutes les cellules vivantes, qui renferme l'ensemble des informations nécessaires

Comment met on en évidence le polymorphisme de l'ADN L'ADN est extrait d'un petit échantillon Il est coupé par une enzyme de restriction appropriée Les fragments obtenus, caractéristiques de chaque personne, sont séparés, selon leur taille, par électrophorèse Certains fragments bien précis sont séparés à l'aide d'une "sonde" radioactive Leur position, variable selon les individus est alors visualisée sur un film photographique Pour mieux comprendre et visualiser le déroulement voici les étapes

d’affinité b- Chromatographie d’exclusion II / Etude des fractions purifiées p.7 1) Méthodes p.7 2) Résultats et discussion p.8 a – Détermination des concentrations en protéines b- Suivi de la purification III / Electrophorèse p.11 1) Méthodes p.11 2) Résultats et discussion p.13 IV / Etude cinétique p.14 1) Méthodes p.14 2) Résultats et discussion p.15 Conclusion p.18 Introduction La Lactate Déshydrogénase (LDH), est une enzyme importante dans la régulation

es derniers ont été introduits dans des bactéries thermo-compétentes pour le clonage. Afin de bien vérifier la réussite des pratiques, la culture des bactéries transformées est faite dans un milieu contenant de l’ampicilline et du X-gal. Les électrophorèses permettent alors de déterminer la taille du plasmide et de l’insert lors de la digestion et des bactéries transformées. Toutefois les résultats théoriques ne sont pas souvent obtenus. INTRODUCTION Les travaux pratiques ont pour but l’application