Électrophorèse sur gel d'agarose

produits d’amplification Préparation du gel d’agarose et electrophorèse : L'électrophorèse en gel d'agarose est une méthode utilisée en biochimie et en biologie moléculaire pour séparer l'ADN, l'ARN ou des protéines en fonction de leur poids moléculaire.La technique de l'électrophorèse en gel d'agarose est basée sur la séparation des acides nucléiques chargés négativement sous l'effet d'un champ électrique. Cette séparation s'effectue à travers la matrice du gel d'agarose : les molécules de plus petites

une hydrolyse de l'ADN par une enzyme de restriction. Cette enzyme de restriction permet de couper un fragment d’ADN. Ensuite pour pouvoir séparer ces fragment de restriction il faut les séparer par électrophorèse sur gel d'agarose : cette séparation s'effectue à travers la matrice du gel d'agarose ; les molécules de plus petites tailles se déplacent plus rapidement et migreront plus loin que les molécules de tailles supérieures. [pic] [pic] Agarose : Macromolécule à base

paillasse • Ajouter 40 µl de TE 0.1x et laisser suspendre quelques heures à température ambiante, puis mélanger à la pipette. Stocker à -20°C • Vérifier la concentration (spectrophotomètre, DO260 and 280 nm) et la qualité de l’ADN extrait (gel d’agarose 1%). DNA extraction buffer Tris 100 mM pH 8 EDTA 20 mM pH 8 NaCl 1.4 mM MATAB 3 % Bisulfite de sodium 0.5 % Chauffer à 74°C avant d’ajouter le MATAB et bisulfite de sodium

protéines dans un gel, par exemple d’agarose, qui est constitué d’une matrice polymère (agarose et polyacrylamide) qui baigne dans un tampon conducteur (solution qui maintient à peu près le même pH malgré l’addition de petites quantités d’acide ou de base). L’agarose sert à séparer de l’ADN ou de l’ARN alors que le polyacrylamide permet de séparer des molécules plus petites comme des fragments d’acides nucléiques ou des protéines. Puis on applique une tension aux extrémités de ce gel et ainsi les protéines

échantillon avec le plasmide non digéré est également préparé ainsi qu'un marqueur de taille (ADN du phage l digéré par HindIII). Cinq dépôts sont effectués, chacun dans un puits du gel d'agarose puis l'électrophorèse est lancée. Après une migration de 40 min (100 v), le gel est révélé (bleu de méthylène). Gel d'électrophorèse après révélation Pour exploiter l'électrophorégramme, il ne faut pas perdre de vue que le plasmide pGLO est, à l'origine

1.2.Extraction des ARN 1.3.Extraction des 1.3.1. Rappel sur les plasmides plasmides 1.3.2. Purification par Lyse alcaline 1.3.3. Purification par Gradient de chlorure de césium 2.Séparation des acides nucléiques 2.1.Electrophorèse sur gel d’agarose 2.2.Electrophorèse sur gel de polyarylamide 3.Elaboration de Cartes de restrictions des 1.Purification des acides 1.1.Extraction nucléiques de =technique l’ADN permettant d'isoler l'ADN de cellules ou de tissus. L'ADN extrait  digestion, hybridation

biologie moléculaire sont le plus souvent anticipées par des techniques de base. Les principales techniques utilisée couramment sont : Les extractions des acides nucléiques Les digestions enzymatiques par les enzymes de restriction Les électrophorèses sur gel Objectifs Au cours de la première séance de Travaux Pratique, nous avons effectué une mini extraction d’ADN plasmidique à partir d’une culture de bactéries d’Escherichia coli, en utilisant la technique de la lyse alcaline. Cette méthode

ELECTROPHORESE SUR GEL D'AGAROSE 1. RAPPELS THEORIQUES L'électrophorèse en gel d'agarose est une technique de base au laboratoire de biologie moléculaire. Elle est utilisée -soit à des fins analytiques: pour séparer et identifier des fragments d'ADN, pour déterminer leur taille, pour en estimer la quantité, -soit à des fins préparatives, pour purifier un fragment d'ADN de taille connue. La taille des fragments qu'il est possible de séparer est comprise entre 0,2 et 50 kb. Les fragments

2014-2015 SEPARATION D’ADN PAR ELECTROPHORESE ANALYTIQUE ET PREPARATIVE OBJECTIF. Le but de ce TP est de purifier l’ADN plasmidique de pUC18-wzc ; d’en établir sa carte de restriction et de calculer le rendement de l’extraction du gène wzc. Pour cela, on fera agir différentes enzymes de restriction sur cet ADN plasmidique puis on réalisera une migration sur gel d’agarose. Pour finir, nous déterminerons la quantité de gène wzc que l’on aura extrait de ce gel. Principe. 1-Préparation de l’ADN

clonage, ADN recombinant, plasmide, pBluescript, électrophorèse, transformation, LacZ, bactérie, phage lambda. Résumé : L’ADN peut faire l’objet de multiples travaux. Ici notre objectif est de cloner des morceaux de l’ADN du phage lambda dans le vecteur (plasmide) pBluescript. Pour se faire nous aurons recours à différentes techniques comme la digestion enzymatique (de l’ADN du phage ainsi que du plasmide), l’électrophorèse sur gel d’agarose, la transformation (par choc thermique) pour l’introduction