Électrophorèse

fractions Fn, Fm comme étant les plus riches en enzyme. - 3ème partie expérimentale : série de manipulations 3. Méthodes et résultats. Suite de l’exemple : - Activité : à partir des fractions Fn, Fm, vérifier la pureté des fractions par électrophorèse (SDS-PAGE, …), suivi d’un Western-blot/révélatioon par kit ECL+ … - Détailler la méthode : choix, principe, conditions électrophorétiques, conditions de blotting, anticorps utilisés, description du kit ECL (chimioluminescence) … - Résultats

blot lorsqu’on confirme un résultat obtenu en sérologie de routine, on utilise parfois un test dit Western blot (WB), qui est une modification du principe ElIsa énoncé plus haut. dans le test WB, les protéines d’un lysat viral sont séparées en électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PagE), ensuite transférées (« blotting ») vers une feuille de nitrocellulose ou de nylon. cette feuille, découpée en lanières, permettra de tester les sérums pour rechercher les anticorps contre les différentes protéines

des ADN 1.2.Extraction des ARN 1.3.Extraction des 1.3.1. Rappel sur les plasmides plasmides 1.3.2. Purification par Lyse alcaline 1.3.3. Purification par Gradient de chlorure de césium 2.Séparation des acides nucléiques 2.1.Electrophorèse sur gel d’agarose 2.2.Electrophorèse sur gel de polyarylamide 3.Elaboration de Cartes de restrictions des 1.Purification des acides 1.1.Extraction nucléiques de =technique l’ADN permettant d'isoler l'ADN de cellules ou de tissus. L'ADN extrait  digestion

Méthode chromatographique: LC/TOF-MS avec APPI II . Méthode électrophorétique: CE couplée à MS-ESI III . Méthode immunologique: ELISA IV . Comparaisons des trois méthodes V . Méthodes sélectionnées et conclusion 5 I . LC/TOF-MS avec APPI II. Electrophorèse capillaire MS-ESI III. Méthode immunologique: ELISA LC/TOF-MS avec APPI Méthode d’extraction • • Agrumes hachés et homogénéisés Extraction de TBZ par l'éther éthylique car Hydrophobe Par structure cyclique • • • • et polaire IV. Comparaison

quotidiennement (l'insuline par exemple, utilisée par de nombreuses personnes). Pour réaliser ce clonage moléculaire nous avons réalisés plusieurs étapes importantes telles que la digestion enzymatique, insertion dans un vecteur de clonage (plasmide), électrophorèse, extraction de l'ADN,... Introduction : Le clonage est la multiplication en grand nombre d'un gène, d'un organise ou d'une cellule souche. Il est très important de nos jours, en effet il nous permet d'obtenir en grande quantité un gène

Chapitre I La technique de dépôt par électrophorèse La technique de dépôt par électrophorèse s’appuie sur un phénomène rapporté au début du 19ième siècle par le scientifique russe Ruess. Celui-ci remarqua la migration de particules d’argile en suspension suite à l’application d’un champ électrique [Ruess1809]. Il fallu cependant attendre 1933 pour qu’une application concrète de l’électrophorèse soit réalisée : un brevet est alors déposé pour le recouvrement de cathode de platine par du tungstène

Compte rendu du TP : électrophorèse de protéines, électrotransfert et immunorévélation But : L’objectif principal de ce TP est l’analyse par électrophorèse des protéines récupérées dans différentes fractions lors du TP consistant à extraire une molécule d’intérêt, le lysozyme, du reste des protéines d’un blanc d’œuf. Principes : - Electrophorèse : il s’agit d’une méthode qui permet de séparer et de caractériser des molécules. Elle se base sur le déplacement de molécules chargées sous l’effet d’un

contenant le plasmide est ensuite possible : il s'agit pour cela de les cultiver au sein d'un milieu contenant l'antibiotique auquel elles sont résistantes grâce au gène apporté par le plasmide. III/ Les résultats A. Digestion enzymatique et électrophorèse Les enzymes de restriction sont des enzymes capables de couper un fragment d'ADN au niveau d'une séquence de nucléotides particulière appelée site de restriction. Chaque enzyme de restriction reconnait un site de coupure particulier, au niveau

microtubes PCR blancs ouverts et vides• 3 microtubes PCR de couleur contenant 10 μL de contrôles positifs (C) • 1 microtube marqué M contenant le Master Mix • 1 Micropipette de 20 μL• Embouts à micropipette de 20 μL• 1 Thermocycleur• 1 Chambre à électrophorèse• 1 Bloc d'alimentation• 1 erlenmeyer contenant de l’agarose liquide à 1 % et le marqueur fluorescent • 1 Lecteur de gel• Tampon d’électrophorèse TAE 0,25 X• 1 Bécher de 500 ml• 1 plat de plastique numéroté• Analyse génétique du chromosome 16S

plasmatiques. Dans un premier temps, nous réalisons une électrophorèse sur gel d’agarose à pH = 9 afin de séparer les différentes protéines. 1/ Sachant que les protéines plasmatiques ont un pH isoélectrique inférieur à 8,8, quelle est leur charge ?2/ En déduire le sens de migration des protéines. 3/ Dans ces conditions, l’albumine a la plus grande mobilité. Qu’en déduire sur la migration de l’albumine par rapport aux autres protéines ? 4/ Une électrophorèse en veine liquide a permis de déterminer que dans