Électrophorèse

et on fait une digestion par des E.R des plasmides que l'ont vient de purifier. En conclusion de ce TP on devrait obtenir des fragments d'ADN lambda clonés. RESULTATS ET DISCUSSION Analyse par électrophorèse de fragments d'ADN: Le TP de bio 57 est composé de deux analyses par électrophorèse sur gel d'agarose. L'électrophorèse en gel est utilisée pour séparer les macromolécules biologiques en fonction de leurs tailles et de leurs charges électriques. Le gel est constitué d'une matrice de

Etude du clonage dans le plasmide pBluescript de l’ADN du phage lambda. Mots clés : Enzyme de restriction, EcoR1, HindIII, vecteur de clonage, ADN recombinant, plasmide, pBluescript, électrophorèse, transformation, LacZ, bactérie, phage lambda. Résumé : L’ADN peut faire l’objet de multiples travaux. Ici notre objectif est de cloner des morceaux de l’ADN du phage lambda dans le vecteur (plasmide) pBluescript. Pour se faire nous aurons recours à différentes techniques comme la digestion

moléculaire a subit pas mal de modification depuis sont apparition pour en faire maintenant une technique facile a utilisé et adapté à diverses applications. Résultats : Dessin : Électrophorèse du phage λ et du plasmide après digestion enzymatique La première électrophorèse réaliser après la digestion enzymatique, nous permet de voir l'état des fragments du plasmides et du phages λ . On peut distinguer le plasmide à gauche du marqueur moléculaire, reconnaissable

la biologie moléculaire sont le plus souvent anticipées par des techniques de base. Les principales techniques utilisée couramment sont : Les extractions des acides nucléiques Les digestions enzymatiques par les enzymes de restriction Les électrophorèses sur gel Objectifs Au cours de la première séance de Travaux Pratique, nous avons effectué une mini extraction d’ADN plasmidique à partir d’une culture de bactéries d’Escherichia coli, en utilisant la technique de la lyse alcaline. Cette méthode

es derniers ont été introduits dans des bactéries thermo-compétentes pour le clonage. Afin de bien vérifier la réussite des pratiques, la culture des bactéries transformées est faite dans un milieu contenant de l’ampicilline et du X-gal. Les électrophorèses permettent alors de déterminer la taille du plasmide et de l’insert lors de la digestion et des bactéries transformées. Toutefois les résultats théoriques ne sont pas souvent obtenus. INTRODUCTION Les travaux pratiques ont pour but l’application

µmoles/min On trouve pour la fraction de départ : Vi = 0,585 DO/min = 9,4.10⁻² µmoles/min Et pour E2 : Vi = 0,045 DO/min = 7,2.10⁻³ µmoles/min Pour le reste (E3, fraction lavage, fraction non retenue) : Vi ≈ 0 µmoles/min Électrophorèses : C1 : p. Une électrophorèse des fractions brute et purifiée a été effectuée. • On constate que sur la fraction brute, on obtient plusieurs tâches. Selon leurs masse, les protéines n'ont pas migré au même endroit et donc il y a différentes protéines présentes

de nombreuses copies de cet ADN pour que celui-ci soit « visible » à la fin de l'analyse. Les fragments d'ADN obtenus sont séparés et identifiés par électrophorèse. Ceci permet de connaître leur longueur et donc d'en déduire le nombre de répétitions. Les deux méthodes de séparations les plus communes sont l’électrophorèse capillaire et électrophorèse sur gel. Il faut rappeler que les gènes permettent la fabrication des protéines. Mais il existe sur l'ADN des portions qui ne codent aucune protéine

l'ADN obtenu peut-être insuffisant pour continuer son analyse.De plus, cette ADN peut être dégradé ou abimé par le temps. C'est pour ces raisons, que nous allons amplifier l'ADN obtenu par une méthode dite PCR. III. La méthode PCR et Electrophorèse A. PCR La réaction en chaîne par polymérase (PCR est l'abréviation anglaise de Polymerase Chain Reaction) va permettre de récupérer une très grande quantité d’ADN avec un échantillon d’ADN très faible, qu’il soit dégradé ou même ancien

final. On aura dans ce cas deux valeurs de concentrations pour un échantillon. 5- Appliquer le cas échéant le facteur de dilution. 6- Exprimer le résultat final en utilisant l’unité demandée. TP de BIOCHIMIE – Licence BB L2 SB4070 TP I pH, électrophorèse T.P. I. PROPRIETES IONIQUES DES ACIDES AMINES Rappels En solution aqueuse, les acides aminés à chaîne latérale non ionisable neutres peuvent exister sous trois formes ioniques différentes selon la valeur du pH de la solution: NH3+ R CH COOH

fractionnement des molécules au sulfate d’ammonium, suivi d’un dessalage par gel filtration avant de présenter l’étape de chromatographie par échange d’ions. Le projet de ces travaux étant finalement de déterminer les masses moléculaires grâce à une électrophorèse SDS PAGE réalisée en condition dénaturante ou non. II. MATÉRIEL ET MÉTHODES Avant toute description du protocole, il est important de souligner que les échantillons sont conservés dans la glace afin d’éviter toute dégradation par des