Électrophorèse

γ)- β mercaptéthanol 4- Centrifugation 5- Congélation 6- Gamme Etalon a- Définition b- Principe α)-BSA β)-échantillon à étudier γ)-réactif de Bradford 7- Électrophorèse a- Définition b- Principe c- Préparation du gel polyacrylamide SDS d- Les % utilisé lors du TP e- Les solutions a préparé α)-tampon d’échantillon β)-tampon d’électrophorèse γ)-gel de séparation

Comment met on en évidence le polymorphisme de l'ADN L'ADN est extrait d'un petit échantillon Il est coupé par une enzyme de restriction appropriée Les fragments obtenus, caractéristiques de chaque personne, sont séparés, selon leur taille, par électrophorèse Certains fragments bien précis sont séparés à l'aide d'une "sonde" radioactive Leur position, variable selon les individus est alors visualisée sur un film photographique Pour mieux comprendre et visualiser le déroulement voici les étapes

TP : Recherche d’allèles mutés pour la mucoviscidose à l’aide d’une électrophorèse d’ADN La mucoviscidose est une pathologie génétique sévère, qui se traduit par une augmentation de la viscosité des sécrétions corporelles, elle atteint particulièrement les voies respiratoires et digestives. En cause, des mutations, plus de 2000 répertoriées qui altèrent le fonctionnement du gène CFTR affectant la synthèse de la protéine transmembranaire CFTR. L’objectif

malt vert (18 points) Cette technique permet de contrôler la qualité du malt en vue de son utilisation en brasserie. Elle s'effectue par électrophorèse bidimensionnelle en gel de polyacrylamide. Première dimension: isoélectrofocalisation (I.E.F.) en gel de polyacrylamide entre pH 2,5 et 7,0. Deuxième dimension perpendiculaire à la précédente : électrophorèse en gel de polyacrylamide dans des conditions non dénaturantes (P.A.G.E.). 2 1.2.1. Première étape : isoélectrofocalisation (document

couper spécifiquement un fragment d’ADN au niveau d’une séquence nucléotidique caractéristique appelée site de restriction. La digestion enzymatique se fait à 37°C pendant 1h30. Préparation du mix pour Rsal et Fokl: 5. Electrophorèse Elle se divise en deux parties : - la migration des ADN extraits et des produits de la PCR - la migration des produits de digestion enzymatiques Pour la première migration on prépare 60mL de gel à 1%. Pour ce faire, on pèse 0,6g d’agarose

caractéristique appelée site de restriction. Chaque enzyme de restriction reconnait ainsi un site spécifique. Egalement on fait agir une Dnase et une Rnase toujours sur cet ADN extrait. Et ces ADN extraits traités différemment sont analysés par électrophorèse sur gel d'agarose, on analyse la présence et la taille des acides nucléiques contenus dans la préparation, mais on détermine également, où ont lieu les sites de restriction spécifique de l’enzyme utilisée. Ceux-ci sont révélés par le bromure d'éthidium

59800 LILLE TUBE SEC OU TUBE SST GEL - CHIMIE : urée, créatinine, acide urique, bilirubine, calcium, magnésium sérique, fer (capacité), phosphore. cholestérol (total-HDL-LDL), triglycérides, apolipoprotéines A1 et B. - PROTIDES : électrophorèse, immunoélectrophorèse, cryoglobulines (37° IgG, IgA, IgM, haptoglobine, C), orosomucoïde, protéine C réactive (CRP), sidérophiline, ferritine, albumine… - ENZYMES : GOT, GPT, LDH, alpha HBDH, CPK, gamma GT, aldolase, 5'nucléotidase, phosphatases

manipulation nous cherchons à séparer les différents monomères de l’enzyme tétramérique. Pour cela nous allons procéder par différents procédés tels que : L’extraction, la purification, la mesure de l’activité enzymatique par spectrophotométrie, des électrophorèses et pour finir des dosages de protéines. L’extraction et la purification : vont nous permettre d’obtenir une enzyme lavée de toutes les molécules « parasites » (comme les protéines ou les inhibiteurs). La mesure de l’activité par spectrophotométrie :

d’ATP radioactif et de polynucléotide kinase. 2. Isolement du fragment d’ADN à séquencer. Celuici est séparé au moyen d’une électrophorèse sur un gel de polyacrylamide. Le fragment d’ADN est découpé du gel et récupéré par diffusion. 3. Séparation de brins: Les deux brins de chaque fragment d’ADN sont séparés par dénaturation thermique, puis purifiés par une nouvelle électrophorèse. 4. Modifications chimiques spécifiques: Les ADN simple-brin sont soumis à des réactions chimiques spécifiques des différents

LDH sont présentes dans cette fraction. Pour les deux autres fractions, l’absorbance est constante, il n’y a plus de LDH, elles se sont surement toutes décollées de la colonne lors du passage de la première fraction d’élution. Electrophorèse : 1ère électrophorèse : En milieu dénaturant Nous faisons migrer deux fractions : la fraction de départ et la fraction purifiée. Nous savons que la LDH fait 35 kDa. Pour la fraction de départ, nous observons un tapis de protéine, variant entre 25 et