Enzyme De Restriction

espérance de vie identique au reste de la population. Un dépistage génétique des familles à risque, fondé sur l’utilisation d’une enzyme de restriction, est donc nécessaire. Les enzymes de restriction coupent les séquences d’ADN en des sites composés de quelques bases et qui leur sont spécifiques, appelés sites de restriction. On cherche à identifier une enzyme de restriction permettant le dépistage de l’allèle muté chez un individu. Matériel : - logiciel ANAGENE et fiche technique d’ANAGENE - fichier

liées aux acides nucléiques Module 2 : La cartographie Module 3 : Le séquençage Module 4 : Les gènes et leur expression I. LES TECHNIQUES LIEES AUX ACIDES NUCLEIQUES Sommaire Préparation des acides nucléiques Extraction/Purification Les enzymes agissant sur les acides nucléiques Dosage et conservation Synthèse in vitro Séparation des acides nucléiques Electrophorèse Ultracentrifugation Détection, caractérisation et identification des acides nucléique Marquage et suivi des acides

séquences courtes reconnues par des enzymes de restriction. Ces séquences permettent l'insertion d'un fragment d'ADN afin de le cloner. Un vecteur de clonage est une molécule de petite taille qui a la capacité de réaliser la réplication de façon indépendante afin d'isoler un fragment d'ADN, il en existe 3 (plasmide, cosmide, phage). De ce fait le plasmide est donc un excellent vecteur de clonage. Tout d'abord il faut digérer l'ADN avec des enzymes de restriction. On veut isoler un gène précis de

étudier le rôle des protéines est le clonage d'expressions. Dans cette technique, l'ADN codant la protéine qui nous intéresse est cloné en utilisant la réaction en chaîne par polymérase (PCR en anglais pour Polymerase Chain Reaction) et/ou des enzymes de restriction dans un plasmide (qu'on appelle vecteur d'expression). Ce plasmide peut avoir des éléments de séquences promotrices spéciales pour diriger la production de la protéine en question et peut aussi avoir des marqueurs de résistance antibiotique

utiliser les capacité des enzymes de restriction ( proteines capables de scinder l ' ADN ) pour étudier le clonage moléculaire grâce à l'outil informatique , c'est le clonage « In Sillico ». Table des matièresTable des matières 1) Les enzymes de restriction :1 a) Le plasmide1 b) Les Enzymes2 2) Digestion du plasmide à l'aide des 2 enzymes de restriction2 3) Digestion du phage Lambda3 4) Insertion d'un fragment de phage dans le vecteur4 1) Les enzymes de restriction :a) Le plasmideOn retrouve

Titre : Sous-Clonage d’un fragment d’ADN dans un vecteur bactérien Matériel biologique : Plasmide PSK Plasmide PCR-gai Enzymes de restriction : EcoRI, HindIII, Xho Introduction : Le clonage d'un gène est une grande technique en biologie moléculaire, c'est une opération consistant à isoler un gène, l'introduire dans un vecteur et à le reproduire en grande quantité. Parfois il est nécessaire d’effectuer un sous clonage permettant d’insérer dans un nouveau vecteur un fragment d'ADN de l’insert

traitements comme l’hydrolyse par une enzyme de restriction, le traitement avec la RNase et la DNase I. Puis chacun de ces traitements sera ensuite déposé puis analysé par électrophorèse sur gel d’agarose. Ils seront révélés par le bromure d’éthidium qui est un colorant et dont la fluorescence augmente en présence d’ADN. Grâce à cette technique, la présence et la taille des acides nucléiques va pouvoir être étudiée, ainsi que la localisation des sites de restriction spécifiques de l’enzyme utilisée.

chromosomique, obtenus après coupure par des enzymes de restriction. La mise au point et les applications de cette méthode ont été décrites par Southern. ll a été inventée par Edwin Southern, un professeur britannique de biologie moléculaire. C'est ce nom (Southern blot) qui a, par jeu de mot, inspiré l'appellation d'autres techniques : western blot, Northern blot et Far-Eastern blot. Principe • après coupure par une enzyme de restriction, les fragments d'ADN sont séparés en gel d'agarose

dans l'UV au moyen d'un spectrophotomètre. L’ADN extrait subit aussi divers traitement au cours de ce TP, en effet, on fait intervenir une enzyme de restriction. L’enzyme de restriction (Ecor1) est une protéine qui peut couper un fragment d'ADN au niveau d'une séquence de nucléotides caractéristique appelée site de restriction. Chaque enzyme de restriction reconnait ainsi un site spécifique. Egalement on fait agir une Dnase et une Rnase toujours sur cet ADN extrait. Et ces ADN extraits traités

technique et applications 1.4 enzyme de restriction 1.4.1 1.4.2 1.4.3 1.4.4 1.4.5 Applications 1.4.5.1 Vecteurs Plasmide (ADN bactérien) pBR322 : vecteur de 4363 pb (très petite tailles) composé de 2 sites de restriction uniques situés dans les gènes de résistance (Amp, Tet). Figure 1 Plasmide bon vecteur car petite taille, 2 sites de résistance qui comprennent un seul site de de restriction chacun. 1.4.5.2 Carte de restrictions Une carte de restriction est une représentation localisant