Extraction D Un Adn Plasmidique

transcrits par Southern Blot. I. Première séance : préparation de la sonde marquée à la digoxygénine Cette séance consiste à extraire l’ADN plasmidique et à le quantifier grâce à des mesures d’absorbances à 260 et à 280 nm. Cette ADN vas nous permettre de réaliser la sonde nptII et un témoin positif T+ par PCR. 1) Extraction d’ADN plasmidique à partir d’E. coli et quantification Nous avons réalisé l’extraction à partir d’une pré-culture d’Escherichia coli ayant le gène nptII qui a

De TP realisé par: •Ramy Meouchy 60952 •Amer Choueib 61122 Première Séance: Extraction de l’ADN plasmidique Bactéries Utilisées : E.Coli dans unmilieu de culture LB (boite de pétri contenant des bactéries ayant déjà subit la transformation). Les différentes étapes de l’expérience : a) Lyse des cellules bactériennes. b) Déproteinisation c)Enlèvement de L’ARN: traitement Rnase d) Précipitation de l’ADN But : ADN une fois extracté, on peut l’amplifier (PCR) , le doser , le séquencer ou le cloner

coli TOP10 1.3.1 - PREPARATION DES CELLULES COMPETENTES. 1.3.2 - REALISATION DE LA TRANSFORMATION. 1.3.3. SELECTION DES TRANSFORMANT 2- ANALYSE DES PLASMIDES TRANSFORMANTS 2.1 - Extraction d'ADN PLASMIDIQUE. 2.2 - DIGESTION ENZYMATIQUE DES PLASMIDES 2.3 - Electrophorèse SUR GEL D'AGAROSEIII. ANNEXES 1 - Composition des milieux utilisés  2 – MARQUEUR DE TAILLE 3 - SEQUENCE de entD

électrophorèse analytique et préparative Objectif L’objectif de ce TP est de préparer et d’extraire l’ADN plasmidique pUC18-wzc à partir d’une souche d’E.coli pour établir une carte de restriction, puis de réaliser une électrophorèse en gel d’agarose afin d’isoler le fragment Eco RI/ Bam HI (wzc). Principe Préparation de l’ADN plasmidique La préparation de l’ADN plasmidique est réalisée à partir d’une souche d’E.coli cultivée à 37°C dont le milieu de culture est éliminé par centrifugation

une épaisseur d'environ 0,5cm et sans oublier de placer les bandelettes qui laisseront place une fois sec aux puits. Pendant ce temps, les deux tubes de la PCR sont préparés c'est à dire que nous avons introduit dans chacun 1µL de tampon de charge ADN 6X qui contient 0,40µL de saccharose et 0,0006µL de bleu de bromophénol). Ainsi les deux solutions ont été introduites dans deux puits distincts puis l'électrophorèse a été mise en fonctionnement sur 100V pendant environ 30 minutes. Les résultats

Eucaryotes ADN exon Procaryotes (bactéries) ADN transcription ARN transcription ARNm traduction protéine ARNm protéine traduction ADN: double brin (A, T, G, C) ARN: simple brin (A, U, G, C) Protéines: acides aminés Principes ORGANISME DONNEUR Clonage et vecteur de clonage ou Technologie de l’ADN recombinant Extraction et coupure de l’ADN en fragment contenant de un à plusieurs fragments d’intérêt. VECTEUR Ou transporteur d’ADN. C’est un

TP Séparation d’ADN par électrophorèse analytique et préparative I. But : Ce TP a pour but d’extraire l’ADN plasmidique pUC18-wzc à partir d’un culot d’E.coli, d’établir la carte de restriction du plasmide grâce à sa digestion par des enzymes et enfin d’isoler et purifier le fragment d’intérêt wzc dans pUC18-wzc. II. Principes : Pour mener à bien ce TP on utilise la technique d’électrophorèse sur gel d’agarose. Cette technique permettra la séparation des différents fragments obtenus par

espèces de tomate, afin de déterminer le moment de son insertion dans la région promotrice de ce gène. Le second est de cloner ce rétro-tranposon dans un vecteur de clonage. 3 TP n° 1 : Extraction, analyse qualitative et quantitative de l’ADN génomique extrait des plants de tomates . I) Extraction de l’ADN génomique des plants de tomates Les plantes de tomate sauvages et de la variété cultivée ont été cultivées en serre ; les feuilles ont été récoltées et immergées dans l’azote liquide, puis

Purification et digestion de l'ADN plasmidique, analyse par électrophorèse. Lors de la purification, le but est de récupérer l'ADN plasmidique, pour cela on réalise la lyse bactérienne. Il s'agit de la destruction de la structure membranaire de la bactérie. Grâce à un dépôt sur colonne, l'ADN plasmidique purifié est récupéré alors que les contaminants sont éliminés. Afin de s'assurer de sa qualité et donc, du bon fonctionnement du clonage, les clones plasmidiques sont ensuite soumis à une digestion

position, variable selon les individus est alors visualisée sur un film photographique Pour mieux comprendre et visualiser le déroulement voici les étapes décrites et détaillées qui permettent de mettre en évidence le polymorphisme de l' ADN. Purification et extraction: Dès que le laboratoire génétique reçoit les échantillons biologiques prélevés, tous les scientifiques se mettent au travail afin d'en extraire l'ADN. Le protocole expérimental général de l'extraction est le suivant : Tout d’abord