Nucléase

cellulaire (bactéries…) Digestion d'organites (mitochondries endommagées et non fonctionnelles) Digestion de molécules. Les lysozymes sont les enzymes du lysosome Produites par le RE et modifiées par le Golgi Lipases, glucidases, protéases, peptidases, nucléases. LES PEOXYSOMES Les peroxysomes = sacs membraneux de 0,5-2µm de diamètre contenant des enzymes oxydases et catalases Rôles : Détoxification : radicaux libres alcool et formaldéhyde. Oxydation des acides gras à très longue chaine quand ils

d'éléments appelés nucléotides, assemblées bout à bout en grand nombre. L'ADN renferme des nucléotides, qui sont formés par l'assemblage d'une base, d'un sucre et d'un acide phosphorique. Dans chaque portion de l'appareil digestif, des enzymes dites nucléases démontent l'édifice pièce par pièce. L'ADN porte dans son architecture moléculaire l'information commandant la synthèse des protéines, c'est à dire la séquence de bases suivant laquelle les acides aminés vont s'assembler pour former une protéine

purification de l'ADN, ces fils subissent des cassures aléatoires de sorte, qu'en termes de séquences, on obtient un mélange héterogène. Ce sont des nucléases, c'est à dire les enzymes spécialisées dans la dégradation des acides nucléiques qui ont permis de régler le problème du découpage non aléatoire d'un génome in vitro. Il existe deux catégories de nucléases selon leur mode d'action : les exonucléases qui dégradent par excision du nucléotide situé en extrémité de chaîne (souvent en 3') et les endonucléases

D2). Le gène vir E : Vir E code pour la synthèse de protéines de protection de l’ADN-t qui viendraient progressivement emballer cette molécule durant son transfert jusqu’au noyau de la cellule végétale, la protégeant de l’attaque probable de nucléases. Le gène vir G : Vir G a également été décrit comme responsable de la synthèse d’un facteur d’activation de la virulence. c. Autres régions Une troisième région du plasmide Ti qui, comme la région vir n’est jamais transférée, est occupée :

limitées par une membrane simple (de 7.5nm) - nombre variable selon le type cellR (peu dans cells rénales, bcp dans macrophage et neutrophile polynucléaires) 2. ASSORTIMENT ENZYMATIQUE DES LYSOSOMES - assortiment avec hydrolase, protéase, nucléases, phosphatases, sulfatase, glycosidases, lipases… - capable de dégrader les composés organiques, fonctionnent à pH acide - intégrité de la membrane des lysosomes indispensable pour éviter l’autolyse 3. PROPRIETES DE LA MEMBRANE DES LYSOSOMES

stériques sont efficaces uniquement s'ils ciblent des régions 5' ou la région du codon initiateur AUG. Le squelette des ODN antisens a été modifié chimiquement pour augmenter leur solubilité, leur stabilité, leur efficacité, leur résistance au nucléases, et leur pénétration dans les cellules. Schéma du mécanisme d’inactivation de l’ARNm par un ODN antisens. Les phosphorothioates : sont les plus utilisés car ils sont relativement stables dans la circulation sanguine et capable d'atteindre

d’Escherichia coli, en utilisant la technique de la lyse alcaline. Cette méthode permet de récupérer facilement et rapidement une grande quantité d’ADN plasmidique plus ou moins pur, c’est-a-dire peu contaminé par de l’ADN génomique des protéines (nucléase et autres…) ou d’autres composants bactériens. Lorsqu’il est suffisamment pur, l’ADN plasmidique peut être digéré sans problème par une enzyme de restriction, ce que nous avons réalisé dans la deuxième séance du TP. Nous pouvons ainsi confirmer

d’ÉCLIPSE ou RÉPLICATION des composants viraux. A ce stade du cycle, le virus a cessé d'exister en tant que particule organisée et naturellement infectante: C'est la phase d'éclipse. (12mn) Le chromosome bactérien est dégradé par une nucléase virale 2 à 3 mn après l’infection en nucléotides. Toutes les synthèses bactériennes sont stoppées. Par contre l’élaboration des structures phagiques est mise en oeuvre. Premier élément : ARNm de type phagiques. A l’aide des enzymes virales,

c'est-à-dire capable de capter et d’intégrer l’ADN exogène. 3.1.2. Les étapes de la transformation : Elle s’effectue en 4 étapes : La fixation de l’ADN exogène bicaténaire à la surface de la cellule compétente. La dégradation d’un brin de l’ADN par une nucléase et pénétration de l’autre dans la cellule. L’association du brin intact avec une protéine de compétence. L’intégration par recombinaison de l’ADN dans le chromosome de la cellule compétente au niveau d’une zone d’homologie. 3.2. La transduction

présent dans les 3 tampon d’extraction ) est par exemple utilisé très fréquemment dans la purification des acides nucléiques (ADN ou ARN) et des protéines . En séquestrant en particulier les ions magnésium Mg2+, il bloque l'activité de nombreuses nucléases qui sont dépendantes de cet ion. L'EDTA est également un inhibiteur des métalloprotéases à zinc et limite ainsi l'hydrolyse des protéines dans les extraits cellulaires. Tris qui a pour propriété d’être un bon tampon pour ces propriétés stables, leur