Tp Séparation Par éléctrophorèse

Compte rendu du TP : électrophorèse de protéines, électrotransfert et immunorévélation But : L’objectif principal de ce TP est l’analyse par électrophorèse des protéines récupérées dans différentes fractions lors du TP consistant à extraire une molécule d’intérêt, le lysozyme, du reste des protéines d’un blanc d’œuf. Principes : - Electrophorèse : il s’agit d’une méthode qui permet de séparer et de caractériser des molécules. Elle se base sur le déplacement de molécules chargées sous l’effet d’un

travaux pratiques illustrent les cours de Biochimie de la 1ère et de la 2ème année de la Licence BB. Le coût élevé de certains appareils nous oblige à adopter une organisation par manipulations tournantes. Pour pallier le déphasage inévitable de certains TP avec le cours, un bref exposé théorique vous donne ou vous rappelle les connaissances nécessaires à la compréhension de votre manipulation. I - Conseils pour la pratique des manipulations de Biochimie I-1 Opérez avec soin et avec méthode tout en

Compte rendu TP électrophorèse de protéines électrotransfert et immunorévélation I) But du TP Lors du premier TP, nous avions essayé de purifier une protéine du blanc d’œuf, le lysozyme, par chromatographie échangeuse d’ions. Dans ce TP, nous allons vérifier cette purification à l’aide d’une électrophorèse sur gel de polyacrylamide. Puis afin d’identifier précisément l’enzyme nous effectuerons un électro-transfert suivi d’une immunorévélation. II) Principe A°) Electrophorèse L’électrophorèse

TP Séparation d’ADN par électrophorèse analytique et préparative I. But : Ce TP a pour but d’extraire l’ADN plasmidique pUC18-wzc à partir d’un culot d’E.coli, d’établir la carte de restriction du plasmide grâce à sa digestion par des enzymes et enfin d’isoler et purifier le fragment d’intérêt wzc dans pUC18-wzc. II. Principes : Pour mener à bien ce TP on utilise la technique d’électrophorèse sur gel d’agarose. Cette technique permettra la séparation des différents fragments obtenus par

INTRODUCTION : L’objectif de ce TP est d’étudier la mobilité de différents types de protéines sur des gels de migration afin d’en déduire leur poids moléculaire PM, leur structure ou leur identité.  Trois familles de protéines vont être utilisées : des lisoenzymes de la lactacte déshydrogénase (isoLDH), de l’albumine sérique de bovin (BSA) et une protéine inconnue Y à déterminer. Une première manipulation consistera à faire migrer par électrophorèse, de la BSA, des isoLDH, des protéines inconnues

PONTILLE Laura VELUD LoicGROUPE : A2 TP BIOLOGIE MOLECULAIRE 1 2014-2015 SEPARATION D’ADN PAR ELECTROPHORESE ANALYTIQUE ET PREPARATIVE OBJECTIF. Le but de ce TP est de purifier l’ADN plasmidique de pUC18-wzc ; d’en établir sa carte de restriction et de calculer le rendement de l’extraction du gène wzc. Pour cela, on fera agir différentes enzymes de restriction sur cet ADN plasmidique puis on réalisera une migration sur gel d’agarose. Pour finir, nous déterminerons la quantité de gène

Principe α)-BSA β)-échantillon à étudier γ)-réactif de Bradford 7- Électrophorèse a- Définition b- Principe c- Préparation du gel polyacrylamide SDS d- Les % utilisé lors du TP e- Les solutions a préparé α)-tampon d’échantillon β)-tampon d’électrophorèse γ)-gel de séparation λ)-gel de concentration V- traitement et analyse des résultats 1- Détermination des concentrations protéiques 2-

la biologie moléculaire sont le plus souvent anticipées par des techniques de base. Les principales techniques utilisée couramment sont : Les extractions des acides nucléiques Les digestions enzymatiques par les enzymes de restriction Les électrophorèses sur gel Objectifs Au cours de la première séance de Travaux Pratique, nous avons effectué une mini extraction d’ADN plasmidique à partir d’une culture de bactéries d’Escherichia coli, en utilisant la technique de la lyse alcaline. Cette méthode

BIOCHIMIE EXPERIMENTALE 1 EXTRACTION DE L’ALBUMINE DU SERUM PAR CHROMATOGRAPHIE D’AFFINITE BUT Le but de ce TP sera d’extraire l’albumine d’un sérum en utilisant une chromatographie d’affinité, de déterminer la concentration d’albumine dans le sérum, puis de vérifier, à l’aide d’une électrophorèse, que la chromatographie a correctement fonctionné. PRINCIPE Chromatographie d’affinité sur Bleu Sepharose CL-6B La chromatographie d’affinité se fait avec une résine sur laquelle nous avons

génotypique des 205 rats F2 et leur phénotype. Ce qui revient à comparer le génotype des marqueurs au phenotype permettant ainsi une localisation grossière du QTL. (localisation primaire du QTL = région du chromosome 10 du rat Aiid2) Dans le cadre de ce TP, nous souhaitons réduire l’intervalle de localisation du QTL. Il s’agit de la deuxième étape du clonage positionnelle. Pour ce faire, les chercheurs ont au préalable construit des lignées congéniques LEWc10BN. L'opération consiste à remplacer une région