Dénaturation Catalase

des adultes (I-2), (II-1 et 3) ou de cellules prélevées par amniocentèse chez le fœtus (III-1). – L’ADN est ensuite traité par l’enzyme de restriction Hae III et les fragments obtenus sont soumis à une électrophorèse sur gel d’agarose. – Après dénaturation de l’ADN, on transfère une empreinte (blot) du gel sur un filtre de nitrocellulose (la position des fragments d’ADN est respectée au cours de ce transfert). – Le filtre est immergé dans une solution contenant une sonde moléculaire radioactive d’ADN

que la protéine est plus difficile à digérer. III) Les propriétés physico-chimiques a) solubilité Les acides sont très solubles dans l'eau. A l'état solides, ils forment des cristaux. b) Comportement à la chaleur Il y a dénaturation des protéines. Ovalbumine (œuf) coagule. Le PH acide permet aussi de dénaturer les protéines. L'alcool permet aussi de dénaturer les protéines. c) La fluorescence La tryptophane et la tyrosine ont la particularité d'émettre une fluorescence

195 nm Application du dichroïsme circulaire -détermination du contenu en structure secondaire d’1 protéine -détermination de l’effet de l’environnement (cations, sels, pH) sur la structure d’une protéine. -Etudes dynamiques : dénaturation, renaturation. Structures super secondaires et motifs Combinaison de quelques structures 2aire possédant un arrangement géométrique spé et formant des motifs ou structures super-secondaires -organisation se structures secondaires consécutives

Appareils à électrophorèse et générateurs - Micropipettes et cônes - Centrifugeur - Bain-marie à 90°C - Gants - Béchers, boites de pétri - Seringues de 10mL - Tubes Eppendorf - Solutions et tampons (à garder dans la glace pour éviter leur dénaturation) Solutions pour la préparation des gels: Acrylamide: Le gel de polyacrylamide permet de séparer des protéines selon leur poids moléculaire PM. La matrice est créée par la copolymérisation d’acrylamide et de bis-acrylamide. Le TEMED

vers l’anode (positive). On aboutit alors à la séparation des fractions protéiques sous forme de zones distinctes. Ici, on utilise le gel de polyacrylamide en milieu dénaturant (en présence de SDS). L’électrophores se compose de deux étapes : 1-Dénaturation des protéines à chaud à 95°C puis en présence de SDS : Les molécules seront séparées ici seulement en fonction de leur masse moléculaire grâce à la méthode SDS-PAGE. Le SDS (sodium dodécylsulfate) est un détergent anionique CH3(CH2)10CH2OSO3-

1 L d’H20. Pour l’ADN, on prendra le plasmide pQE30::SNAP purifié. Ajouter 1 L de Taq polymerase (2 U). Le volume final est de 20 L. Programmer l’appareil de PCR suivant le schéma suivant : 94°C 2 min dénaturation initiale de la matrice 94°C, 30 sec denaturation 50°C, 30 sec annealing 72°C, 1 min extension 20 cycles 68°C, 10 min extension de tous les fragments générés 4°C, temps indéfini conservation des échantillons Après la PCR, conserver les échantillons

INTRODUCTION : Dans ce laboratoire, nous devions étudier l’activité enzymatique de la catalase. Nous voulions savoir si l’activité de cette enzyme était toujours la même peut importe le milieu ou la concentration. Pour ce faire, nous avons pris un mélange de peroxyde d’hydrogène et de catalase dans lequel d’expérience en expérience nous avons fait des modifications. Nous avons d’abord changé la concentration de l’enzyme pour une même quantité de peroxyde. Par la suite, nous avons modifié

théorique     La catalase agit d’une manière très semblable à n’importe quel catalyseur inorganique.  Elle se charge de dégrader le peroxyde d’oxygène (H²O²).  Une grande majorité du vivant s’en sert pour l’éliminer.  Elle le transforme en deux composés plus amicaux pour le vivant, soit de l’eau (H²0) et de l’dioxygène (O²). 2H²O² + Catalase -> 2H²O + O²     Comme mentionné plus haut, une modification de l'environnement standard aura une influence sur sa possible dénaturation.  Une augmentation

dans une deuxième partie, nous observerons et nous déterminerons la concentration en levures d’une suspension. Enfin, dans un troisième temps, nous utiliserons différents tests biochimiques tel que la coloration de GRAM, la recherche d’activité catalase/oxydase, la recherche d’endospores bactériennes ou encore la détermination du type respiratoire, afin d’identifier les microorganismes présents sur des aliments contaminés. Pendant toute la durée de ce TP nous travailleront en condition d’asepsie

vitesse en absence de catalyseur (qui est souvent très lente). Ces facteurs d'accélérations sont bien supérieurs à ceux obtenus avec les catalyseurs chimiques. Par exemple, la dégradation de l'eau oxygénée est lente en absence de catalyseuralors que la catalase, qui est l'enzyme dégradant l'eau oxygénée (H2O2), peut dégrader plusieurs milliers de molécules par seconde. -Les réactions biochimiques sont possibles dans les 2 sens, elles sont réversibles. Les enzymes accélèrent les 2 sens de réaction dans