Incube

mise en culture des germes contenu dans le sperme dans les quatre milieux (mac conkey, gélose au sang, gélose chocolat et chapman). On met une goutte de sperme sur la gélose et on l’étale avec l’anse ou une pipette pasteur. Les milieux sont ensuite incubés à 37°C pendant 24h sans oublier de mettre les géloses au sang et chocolat dans la jarre avant de les mettre dans l’étuve. Sur une lame on met une goutte de sperme qu’on étale ensuite le long de la lame, en évitant de tuer les spermatozoïdes

VENZYME puis mettre dans l’eppendorf => mélanger -mettre dans le capot 1µl d’ADN à 1 Δ (D et ND) -ajouter le mélange pour les digestions dans le capot (9µl) -pour les non-digéré, mettre 8µl d’eau dans le fond du tube =>mélanger -incuber à 37°C pendant 2H (le temps minimum pour digérer est de 30min) -> Préparation du gel d’agarose -peser dans une erlenmeyer 1g d’agarose ultra pure -mettre 100ml de tampon de charges à 1X ou 0.5X dans l’erlenmeyer -passer au micro-onde

total. 4) Prélever 200 µl pour chaque dilution d’Ag et les déposer dans les puits correspondants. Rappel : le premier puits est la solution mère (dilution No.1) qui vous est donnée, soit 10 puits au total par Ag (x2 Ag A et AgB). 5) Laisser incuber toute la nuit (O.N.) à 4ºC. 6) Couvrir votre plaque avec une autocollant pour éviter l’évaporation de solutions. 7) N’oubliez pas d’indiquer dans votre plaques : vos initiales du binôme et le groupe de TP. Licence SPS-L3S5 TP Exp. En Biologie

suivant : Glucose: 16g/l; (NH4)2 SO4: 1g/l; K2HPO4: 7g/l; KH2PO4: 3g/l; MgSO4, 7H2O: 0,1g/l. Pour étudier la croissance bactérienne de cette souche, ce milieu a été ensemencé à partir d'une culture de 24 h de cette souche sur gélose nutritive puis incubé dans les conditions optimales de température et de pH. L’évolution du nombre de bactéries en fonction du temps est schématisée sur la figure 1. 1) Délimiter sur le graphe ci-dessus les différentes phases de croissance; interprétez et qualifiez

|1000 µl |1000 µl |1000 µl | |Mélanger et incuber pendant cinq minutes à température ambiante | |T2 |200 µl |200 µl |200 µl |200 µl | |Mélanger et incuber à température ambiante pendant dix minutes, puis lire au spectrophotomètre à 580 nm. Linéarité : 3,0 g/l

membrane par une pince flambée. On la place sur le milieu de culture en do c, la surface qui était en contact avec l’eau vers le haut. Remarque : aucune bulle d’air ne doit exister entre la membrane et le milieu de culture. Incuber à 37 ° C pendant 48 heures. Lecture des résultats : Les colonies de coliformes totaux apparaissent rosâtres ou rouge brique. Expression des résultats : Coliformes totaux /100 = A × 100

Incubation Placer les boites à l'étuve à 37°C (incuber les boîtes couvercle vers le bas pour que la condensation s'accumule dans le couvercle) . Pour la recherche de coliformes, placer les boîtes à 37°C pendant 24 et 48 heures. Pour la recherche de coliformes thermotolérants, placer les boîtes à 44°C pendant 24 et 48 heures. Résultats Identification des colonies et dénombrement Le dénombrement des bactéries repose sur le principe selon lequel une colonie se forme par divisions d'un seul

noter la présence des espèces morphologiquement différentes ainsi leur Gram. Mise en culture : A l'aide d'une pipette Pasteur stérile ou une anse de platine, on ensemence 10 ul d'urine pure non diluée sur une boite de gélose CPS ou CLED, puis on incube à 37°C pendant 24heures. Deuxième jour : Numération des bactéries : On apprécie le nombre de colonies (UFC : Unité Formant Colonie) sur la boite et le comparer par rapport aux normes. Identification des bactéries : Après incubation

milieu sélectif excellent qui ne laisse pousser, que très rarement cultiver, des Gram (-) (pseudomonas en particulier). Un milieu «  tous germes Gram négatif » usuels c’est à dire entérobactérie et Pseudomonas. Le milieu Mac conkey. Incuber : - 24 h à 37°C en atmosphère ordinaire le milieu tous germe Gram (-). - 48 h à 37°C en atmosphère enrichie en CO2, les autres milieux. Remarque : - L’examen direct permet d’orienter le choix vers d’autres milieux de cultures très

stériliser, 2 indicateurs : indicateur biologique : tube avec à l’intérieur une ampoule scellé contenant du milieu de culture et une tige de papier recouvert d’une spore bactérienne, on casse l’ampoule aseptiquement et on met le tube à l’étuve (à incuber) quelque jours, en absence de croissance l’autoclavage est considéré comme étant réussit. Avantage de cette indicateur, très grande fiabilité, inconvénient le délais d’attente des résultats. On préféré l’utilisation d’un Scotch spécifique, qui porte