Incube

séquence de la boîte a qui n’a pas été incubé avec la protéine Z recombinante; la piste II correspond à la migration d’un oligodésoxynucléotide radioactif contenant la séquence de la boîte a qui a été incubé avec la protéine Z recombinante. Les pistes III à VI sont à interpréter. Dans les pistes IV à VI, un oligodésoxynucléotide radioactif contenant la séquence de la boîte a a été utilisé. Dans les pistes III à V, les oligodésoxynucléotides radioactifs ont été incubés en présence de la protéine Z recombinante

milieu ambiant est très sec, le champignon peut ne pas apparaître à l'extérieur de l'insecte. ISOLATION PRELIMINAIRE Ce qu'il faut faire avec les insectes qui viennent de mourir et qui ne présentent aucune excroissance visible: 1 Laisser incuber pendant plusieurs jours à une humidité élevée. 2 Observer pour déceler toute sporulation. 3 Placer les spores sur une lamelle dans de l'eau, ou utiliser un colorant spécial pour les champignons ATTENTION Si l'insecte n'a pas été correctement

bactéries lactiques. Le lait est ensuite ensemencé : apport des 2 bactéries lactiques (Streptococcus thermophilus, lactobacillus bulgaricus). Cet ensemencement se fera, dans ce TP, par l’ajout de yaourt dans le lait. Ce lait ensemencé sera ensuite incubé à différentes températures et avec des durées d’incubations différentes suivant le tableau suivant : Tableau 1 : temps et température d’incubation |Tube |Yaourt (Y) |YT |Y0 |Y1 |Y2

Date : 02.04.2014 Culture Eco-Phoenix. Matériel PBS 1X sterile DMEM (4,5g/l glucose) + 10% FCS i 407 + 1 mM PyrNa + PS Trypsine diluée 1. Aspirer le milieu de culture et laver les cellules au PBS. 2. Ajouter 1 mL de trypsine diluée pour une T75 et incuber 5 min à 37 °C. 3. Decoller les cellules en tappant sur le bord de la boite. 4. Ajouter 9mL de milieu et rincer la surface de la boite 2-3 fois. 5. Recuperer les cellules dans un falcon et centrifuger 5 min à 1200 rpm. 6. Enlever le surnageant et resuspendre

colonie, incuber overnight à 37°C. Le lendemain, prélever 1 ml de culture, transférer dans un eppendorf, centrifuger pendant 1 min à 13 000 tr/min et aspirer le surnageant. Méthode par lyse alcaline avec phénolisation (pour les souches MC 1061, BJ et JC 5176)[modifier | modifier le code] Placer les eppendorfs à 4° sur glace. Resuspendre le culot dans 100 µl de TGE refroidi, vortexer. Ajouter 200 µl de solution de lyse NaOH/SDS, mélanger en inversant deux trois fois le tube. Laisser incuber 2 min

chaque plaque initiale dans 150 ml de milieu 2YT en présence de chloramphénicol 12mg/ml. NB. La pré culture s’avère nécessaire pour obtenir des filtrats à effets reproductibles sur cellules eucaryotes. -Incuber 8 heures à 37°C - Repiquer en microplaques dans les mêmes conditions - Incuber 16h à 37°C - Ajouter 50 ml d’une suspension de billes de verre 106 microns (1 g/ml dans 2YT chloramphénicol) prélevée dans une augette sous agitation - Broyer 2 fois pendant 1.50 min, 15 hertz - Filtrer

: - gélose au chocolat - milieu Drigalski *en gouttes sur : - gélose au sang - milieu Müeller Hinton Les cultures sur gélose au sang et sur gélose au chocolat seront incubées à 37°C sous 5% de CO2 pendant 24h. 13 Les autres milieux seront incubés à 37°C pendant 24h suivies de la lecture : Si plus de 10 colonies : >10^6 UFC/ml Sinon : 50 établir la formule. 2. Faire un frottis : sur frottis coloré au bleu de méthylène, rechercher les cellules bronchiques et établir les pourcentages de PNN

I- Matériel et méthodes 1- Purification et caractérisation de la stathmine -pré-culture : On effectue un isolement sur une boite de pétri qu’on incube toute la nuit à 37°C, puis dans 4 tubes on met 5 mL de LB + 5 µL d’Ampicilline et dans chacun de ces tubes on met une colonie de bactéries isolées prélevées de la boite de pétri ; on incube toute la nuit. On garde 2 des 4 tubes correspondant aux cultures qui ont le mieux poussées, après cela on prélève 500 µL des 2 milieux qu’on ajoute à 5

avec deux antibiotiques différents(Ampicilline et Chloramphénicol). Ensuite , les 16tubes(car 2 tubes servent de contrôle pour chaque série ) sont incubés à 37°C pendant 24h. La CMI étant la plus faible concentration d’antibiotique capable d’inhiber dans un milieu toute culture visible de la souche étudiée , en observant les tubes préalablement incubés la veille, nous déterminons à quelle concentration minimale non détectons une inhibition de la culture visible d’E.Coli. Résultat et analyse :

Les tubes de la gamme doivent être incubés 24 heures à 37°C en atmosphère ordinaire. 4. Réalisation des témoins inoculum  Réaliser une dilution en série de l'inoculum, de la dilution 10-1 à la dilution 10-4.  Étaler, sous forme de strie, les dilutions 100, 10-1, 10-2, 10-3 et 10-4 sur deux géloses PCA (Plate Count Agar) pour dénombrement. Les stries sont réalisées à l'anse calibrée de 10 L. Doubler les stries pour les dilutions cibles 10-3 et 10-4.  Incuber 24 heures à 37°C en atmosphère ordinaire