Méthode Electrophorèse Sds Page

et Ranger Lydia (RANL21579306) Université du Québec à Montréal Département des Sciences biologiques 3 octobre 2014 Table des matières Table des matières i Table des tableaux et des figures ii Résumé iii Introduction 1 Matériel et Méthodes 5 Résulats 9 Observations microscopiques des fractions 9 Fractionnement cellulaire, matériel biologique et dosage protéique des fractions 10 Cinétique enzymatique 11 Gel d’électrophorèse 14 Discussion 16 CONCLUSION 20 Références 21 Annexe

fractions. Calcul de l’activité enzymatique totale AET = AE / Vprise d’essai *Vfraction Exemple Fraction 1 : AETfraction1= 28.9 / 0.02 * 25 = 36125 U C/ Dosage des protéines La méthode colorimétrique de Bradford est une méthode d'analyse spectroscopique utilisée pour mesurer la concentration des protéines en solution qui repose sur la fixation non-covalente du Bleu de Coomassie sur ces dernières. La quantité de protéines dans les essais est donc déterminée

réaction. Isoenzymes : enzymes catalysant la même réaction sur le même substrat, mais ayant des structures protéiques différentes. Exemple : la LDH tétramérique possède 2 types de protomères (H et M). Il en résulte 5 isoenzymes séparables par électrophorèse (H4, H3M, H2M2, H3 et M4) La répartition des isoenzymes varie en fonction des organes (H domine dans le cœur, M dans le muscle). La plupart des enzymes = protéines Exception : certains acides ribonucléiques, les ribozymes holoprotéines (uniquement

contenant 5% de CO2. Western blot 600000 cellules ont été resuspendues dans du tampon Laemmli, puis bouillies 5 min et conservées à -20°C jusqu’à utilisation. Une même quantité de protéines a été distribuée dans chaque puits d’un SDS-page à 12%. Après électrophorèse les protéines ont été transférées sur une membrane de nitrocellulose selon la procédure standard. La membrane a été incubée pendant une nuit à 4°C, en présence d’un anticorps primaire anti-cycline D1 (1/300), anticorps polyclonal de

constant ( Fig. 1D ). Ces données confirment que la perte de nPTB et les protéines PTB coïncide avec le début de la différenciation musculaire, mais que pour nPTB une perte correspondante de l'ARNm ne se produit pas. Voir version agrandie: Dans cette page Dans une nouvelle fenêtre Télécharger en tant que diapositive PowerPoint Figure 1. protéines nPTB est presque éliminé lors de la différenciation des myoblastes C2C12, tandis que les niveaux d'ARNm augmentent. ( A , hautpanneau) immunoblot des protéines

............................. 53 V.5.1 Les méthodes physiques................................................................................... 54 V.5.2 Les méthodes chimiques. ................................................................................. 57 PARTIE III. LES METHODES D’ETUDES EN ECOLOGIE MICROBIENNE. ................. 60 I LES METHODES CULTURE-DEPENDANTES. ....................................................... 60 II LES METHODES CULTURE-INDEPENDANTES. ....................

moins important par rapport à celui de LSU (Spreitzer, 1999). Quant au rôle de la SSU, il semblerait que cette sous-unité ait une fonction majeure dans l'assemblage et l'efficacité catalytique de la Rubisco (Spreitzer R.J., 1999). Toutefois, aucune méthode cristallographique ou de mutagenèse dirigée n'a réussi à élucider le rôle exact de cette SSU dans le mécanisme catalytique (Afif, 1993). La ribulose-1,5-biphosphate carboxylase / oxygénase est l'enzyme responsable de la fixation du CO2 atmosphérique

.................................................................. 30 2.1.2. Le raffinage de l’huile. ................................................................................................................................... 33 2.2. Méthodes alternatives de production de l’huile de colza. .................................................................... 40 2.2.1. Recherche de solvants et de procédés d’extraction « alternatifs ». ..................................................

fondamentale et moléculaire 2 TABLE DES MATIERES I- Interaction protéine-ligand : caractérisation des sites de fixation page 3 II- Enzymes michaeliennes page 4 III- Inhibiteurs enzymatiques page 8 IV- Enzymes allostériques page 16 V- Cinétiques à plusieurs substrats page 19 VI- Étude des sites actifs page 25 VIII- Énoncés d’exercices d’examen page 27 3 Interaction protéine-ligand : caractérisation des sites de fixation 1er Exercice 2ème Exercice On étudie

de muscle. On obtient des anticorps anti-myosine en injectant de la myosine humaine purifiée à un lapin. Les anticorps anti-myosine sont isolés à partir du sérum du lapin. Ces anticorps peuvent être greffés par de la fluorescéine (IF directe) par méthode chimique; les anticorps anti-myosine non fluorescents peuvent aussi être mis à incuber sur la préparation de muscle humain puis détectés par des anticorps de cheval anti-anticorps de lapin (préparés à partir du sérum de cheval immunisé contre les