Tp Purification

                            M = 234,3 g.mol-1                             Peu soluble dans l’eau, relativement soluble dans l’éthanol, soluble dans l’acétate d’éthyle à chaud                             Irritant par contact avec la peau - Fiche de TP –   1. Réaction de condensation • Équiper un réacteur de 250 mL d’une agitation mécanique, d’un réfrigérant à reflux, d’une ampoule de coulée et d’un thermomètre. • Introduire dans le réacteur 9,4 g d’hydroxyde de sodium, et 95 mL d’eau

(TAT) de Rat, par PCR et son sousclonage dans le vecteur d’expression pGEM-T Amplification de l’ADNc Tyrosine Amino Transférase (TAT) de Rat, par PCR et son sous-clonage dans le vecteur d’expression pGEM-T. I) Introduction : L’objectif de ce Tp est de sous cloner l’ADNcomplémentaire à l’ARNm codant pour la Tyrosine Amino Transférase de Rat. Pour cela, l’ADNc sera inséré dans un plasmide et pourra donc être transcrit in vitro en ARN qui sera utilisé comme sonde pour étudier l’expression du

système endomembranaire (F4) et le cytosol contenant les protéines solubles (F5). Lors du TP, les différentes fractions ont été soumises à différents dosages d’activités enzymatiques telles que l’activité de lactate déshydrogénase, l’activité de la glucose-6-phosphatase, l’activité de la cytochrome C oxidase. Ces dosages nous ont permis de mettre en évidence la localisation subcellulaire de l’enzyme dosée. Ce TP nous a permis de définir ce qu’est une enzyme marqueur et de replacer chacune des activités

vecteur d’expression pGEM-T. Pour cela, l’ADNc sera introduit dans un plasmide et pourrait ainsi être transcrit in vitro en ARN, afin d’être utilisé comme sonde pour étudier l’expression du gène TAT. Figure 1 : Schéma de la stratégie générale du TP Dans ce TP, nous n’allons effectuer les étapes qu’à partir de la PCR, les étapes précédentes ayant été faites par les professeurs pour nous faire gagner du temps sur nos manipulations. En premier lieu, nous amplifierons la séquence d’ADNc TAT par la technique

3. Réactions enzymatiques : restriction et ligation 4. Electrophorèse en gel d’agarose a) Migration/Séparation b) Conditions opératoires c) Visualisation d) Purification III. Résultats et discussion 1. Gel 1 2. Gel 2 B. Transformation bactérienne I. principes 1. la chimiocompétence 2. l’électroperméabilisation II. Résultats et discussion

Correction des question sur le TP de la synthèse de l’aspirine ( séquence 9 ) La transformation : 1°) Les réactifs de la synthèse sont l’anhydride acétique et l’acide salicylique ( l’acide phosphorique est un catalyseur, ce n’est pas un réactif car un réactif est une espèce chimique qui est consommée au cours de la transformation. ) 2°) L’acide salicylique réagit avec l’anhydride acétique pour former de l’acide acétylsalicylique et de l’acide acétique 3°) acide salicylique + anhydride acétique

TP n°4 chimie Présentation de la démarche La réaction en milieu acide entre le groupe amino du 4-aminophénol (ou paraminophénol) constitue la dernière étape de la synthèse du paracétamol. Le paracétamol porte un groupe amide ; c’est un médicament possédant des propriétés analgésiques et antipyrétiques. [pic] Le produit est ensuite cristallisé, filtré et séché, puis purifié par recristallisation. L’identification est faite par CCM et par mesure de la température de fusion. Données

I- But : Le but de ce TP est d’obtenir l’isocitrate déshydrogénase (IDH) par voie recombinante. On utilise comme système d’expression E.coli (souche JM109) transformé par le plasmide pGEX-2T dans lequel on a inséré le gène de l’IDH. L’IDH recombinante exprimée est en fusion avec la glutathion-S-transférase (GST) à des fins de purification par chromatographie d’affinité sur une colonne glutathione sepharose 4B. L’IDH peut être étudiée et dosée après clivage de la protéine de fusion par la thrombine

PCSI - Lycée Brizeux - Quimper TP - Chimie organique TP n 4 : Traitement et purification par distillation ˚ fractionnée d’un milieu réactionnel d’estérification Proposition de correction 0.1 Travail préparatoire 1. Quelles sont les précautions opératoires à prendre pour optimiser la sécurité lors des manipulations ? (1 pt) Les produits manipulés sont inflammables, nocifs par inhalation et peuvent provoquer de graves brûlures. Il convient donc de porter les équipements de protection

préalable le polycopié du TP concerné y compris et surtout les annexes. Il est fortement conseillé de préparer à l’avance le compte-rendu qui sera remis à l’enseignant à la fin de chaque séance. Prévoir du papier millimétré. Présentation du compte-rendu : - résumer brièvement le but de la manipulation en une dizaine de lignes (inutile de recopier le polycopié !!! ) - faire ressortir les résultats expérimentaux et surtout leurs critiques. - ANNÉE 2009 - 2010 - TP Biochimie LV 232 – Année