Catalyse enzymatique

DEPARETEMENT DE BIOLOGIE TRAVAUX DIRIGES DE BIOCHIMIE SV(4) CINETIQUE ENZYMATIQUE 1) Que devient la valeur de la vitesse d’une réaction quand [S]= Km, 2Km, 4Km et nKm? 2) 2. Si la valeur de la vitesse maximale d’une réaction étant de 100 µmol/min et Km avec une valeur de 2mM, quelle sera la valeur de la vitesse de la réaction quand [S]= 2µM et 2M ? en déduire la zone qui délimitera les différents types d’ordre cinétique enzymatique. 3) L’étude de l’activité de la trypsine sur la carbobenzoxylysine

Gamme étalon : Pour la réaliser, nous avons ajouté du PNP de concentration croissante. Grâce à cette droite étalon nous pourrons, par la suite, établir une correspondance entre la densité optique que l’on obtiendra pour différents essais enzymatiques et la concentration de PNP dans ceux-ci. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | Tampon tris-HCl 0.1 M pH 8.3 0.75mL | + | + | + | + | + | + | PNP 0.5 M (mL) | 0 | 0.025 | 0.050

1 STL – CBSV    Thème 2 : Nourrir les cellules  avril 2015  Chapitre 12 : les phénomènes mécaniques et biochimiques de la digestion Etude de la spécificité des enzymes de la digestion Objectifs : o Suivre une réaction enzymatique au cours du temps o Mettre en évidence l’action d’une enzyme o Mettre en évidence la spécificité des enzymes, o Identifier le groupe caractéristique des espèces chimiques impliquées dans la réaction d’hydrolyse de l’amidon Activité 1 : Etude de la structure de quelques

fonction du temps. Méthode : Mesure de l’absorbance par spectrophotométrie à 540 nm. Précipitation à l'éthanol. Le principal inconvénient de cette méthode est le grand volume d'EtOH qu'on doit utiliser, au moins quatre fois celui de la solution enzymatique aqueuse. Il faut souligner en plus que la précipitation n'est pas complète, car certaines protéines sont plus ou moins solubles dans l'éthanol. EXTRACTION ET PURIFICATION PARTIELLE DE L’AMYLASE Rôle des différentes étapes de la

COMPLEXE ENZYME – SUBSTRAT D'après Jacques Barrère, Lycée Paul-Louis Courier, Tours On sait que : • Les enzymes sont des catalyseurs d'une très grande efficacité. • Au cours d’une réaction enzymatique, le substrat se transforme progressivement (phénomène progressif nécessitant 3 à 5 minutes) en présence de l’enzyme qui reste inchangée. • Il y a spécificité entre enzyme et substrat. Il y a spécificité de la réaction catalysée par une enzyme donnée. • Plus il y a de substrat

Exercices - Cinétique enzymatique 1. Que devient la valeur de v /Vmax quand [S ] = 4 K m ? 2. Si Vmax = 100 μmol / ml / s et Km = 2mM, quelle est la vitesse de la réaction quand [S]=20 mM ? 3. Dans une réaction à cinétique de type Michaelis-Menten, k1 = 7 X 10 7 M −1 s −1 , k −1 = 1 X 103 s −1 , et k 2 = 2 X 10 4 s −1. Quelles sont les valeurs de Ks et de Km? La fixation du substrat atteint-elle l’équilibre ou plutôt l’état stationnaire? 4. Les résultats suivants sont obtenus au cours d’une

Pierce mettent au point la technique d'immunoenzymologie, technique d'analyse par réaction entre antigènes et anticorps et utilisant comme marqueur des enzymes. Principe: La technique ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) est une technique immuno-enzymatique de détection qui permet  de visualiser une réaction antigène-anticorps grâce à une réaction colorée produite par l'action sur un substrat d'une enzyme préalablement fixée à l'anticorps. Avantages de la technique: * L'utilisation d'anticorps

préparées juste avant. On ajoute ensuite 0,25mL d’enzyme au 1,75 mL de solution de substrat présent dans chaque cuve de D.O et on mesure l’absorbance en fonction du temps. On pourra en déduire la quantité de produit formé au cours de la réaction enzymatique, la vitesse initiale de cette réaction en fonction de la concentration en substrat et l’ordre de réaction. Les résultats des mesures sont reportés sur le graphique 1 (figure 2) en annexe. La densité optique mesurée à 410nm de chaque solution nous

μM/min. On voit que plus la concentration en substrat est élevée plus le coefficient directeur augmente donc plus la vitesse initiale augmente. L'équation de Michaelis Menten donne la relation entre la vitesse initiale d'une réaction enzymatique et la concentration en substrat: avec vi la vitesse initiale [S] la concentration en substrat donc en PNPP Vm la vitesse maximale qui peut être atteinte que lorsque la concentration en PNPP est saturante

Le tutorat est gratuit. Toutes reproductions ou vente sont interdites. Enzymologie : Calculs Résolution de QCM
Activité enzymatique • On constate après incubation de 30 minutes, en présence de 0,5 ml d’un sérum dilué 100 fois, une hydrolyse de 150 nmol de paranitrophénylphosphate, substrat de la phosphatase alcaline. L’activité phosphatase alcaline du sérum, exprimée en UI/L de sérum sera : 150 . 10-3 μmol x 100 (dilution !) AE = ------------------------------------------------ = 1000