Catalyse enzymatique

biochimiques. Partie enzymologie Définir les termes d'enzymologie : enzyme, substrat, produit, coenzyme, activateur, inhibiteur, réaction enzymatique, propriétés et classification des enzymes (nomenclature). Rappeler la cinétique chimique, en terme de notion d'ordre d'une réaction, réactions élémentaires et complexes formées. Etudier la vitesse d'une réaction enzymatique en fonction du temps, de la concentration d'enzyme, de la concentration du substrat, en représentation graphique normale ou en double

Dans certain cas, les réactions peuvent être tellement lentes que l’on doit avoir recours à un catalyseur pour les accélérer et ainsi, pouvoir les mesurer. On donne le nom de « réaction enzymatique » à ces réactions, dont le processus est accéléré par une enzyme. Or, cette expérience enzymologique étudie l’effet que peut avoir la concentration d’enzyme sur la vitesse de la réaction. De plus, on tente d’élucider l’effet du pH sur la réaction ainsi que l’effet de la concentration du substrat. Pour

Exercice 1 Exercice enzymologie Pour l’étude d’une poudre A possédant une activité enzymatique, on en dissout 0,1 g dans une solution tampon convenable et on complète à 10 ml, on obtient ainsi la solution B. Les mesures d’activités enzymatiques sont effectuées après dilution de 1 ml de solution B dans 9 ml de solution de substrat (S). La concentration en substrat dans le milieu réactionnel est de 10 Km (Km = 1 mmol.L-1) [P] (µmol.L-1) 10 5ème année de Pharmacie 2010-2011 K. CHIKH 8 6 4 2 0 2

donc compte de l’activité enzymatique. Les différents paramètres cinétiques de notre enzyme sont reliés par l’équation de Michaelis-Menten : v=Vm×[S]KM+ [S] * Dosage spectrophotométrique Le principe est de mesurer à l’aide le spectrophotomètre l’absorbance d’une solution pour une longueur d’onde donnée. Cette mesure est directement proportionnelle à la concentration du produit étudié. Or la concentration de ce produit est le fruit d’une activité enzymatique plus ou moins intense de la

alcaline de veau. Il s’agit d’une enzyme alcaline à 2 substrats, capable d’hydrolyser les monoesters phosphoriques selon la réaction suivante : R-O-PO3 2- + H2O R-OH + HPO4 2- II. Principe Afin de suivre la réaction enzymatique, nous allons réaliser un dosage spectrophotométrique des produits apparus dans le milieu, lorsque l’enzyme est en présence de son substrat. Pour faciliter le dosage, nous allons utiliser comme substrat le P-nitrophénolphosphate (PNPP) qui

Etude expérimentale de la phosphatase alcaline I. BUT : Etude cinétique de l’activité enzymatique d’une enzyme la phosphatase alcaline .On procède à :  Une étude cinétique de la libération des produits de la réaction.  Etude de l’influence de la concentration de substrat(PNPP) sur la vitesse de la réaction.  Etude d’un phénomène de compétition entre deux substrats. II. PRINCIPE :  L’ étude cinétique de la libération des produits de la réaction

(TL4VC01U) Crédits ECTS : | 6 | Responsables : M. BEAUVOIT BERTRAND   Contenu : Programme : Cours et TD -Définition et mise en place des principales voies métaboliques des sucres, acides gras et acides aminés -Bases d'enzymologie : cinétique enzymatique Travaux pratiques - Détermination des caractéristiques cinétiques (Vm, Km, kcat) d'une enzyme Contrôle des connaissances :  Coefficient : 0.2 Contrôle continu   Coefficient : 0.2 Examen TP   Coefficient : 0.6 Examen   Microbiologie

absorbe à une longueur d‘onde donnée. Pour notre TP, le spectrophotomètre est relié à un ordinateur pour permettre de visualiser l’évolution de l’absorbance d’une solution de concentration donnée en substrat, autrement dit l’évolution de la réaction enzymatique, pendant un intervalle de 3 min. Cela nous permet de déterminer ensuite la vitesse initiale de la réaction en déterminant la pente de la tangente à la courbe qui passe par le 0. On détermine donc le ΔDO/min pour les temps initiaux de la réaction

facteur de dilution ex : dilution 1/50) le plus souvent on veut retrouver l’AE initiale, après avoir fait les mesures sur la solution diluée : e AEi = AEf x Vf/Vi ex : pour la dilution au 1/50 : AEi = AEf x 50 Résolution de QCM → Activité enzymatique • On constate après incubation de 30 minutes, en présence de 0,5 ml d’un sérum dilué 100 fois, une hydrolyse de 150 nmol de paranitrophénylphosphate, substrat de la phosphatase alcaline. L’activité phosphatase alcaline du sérum, exprimée en

CINETIQUES DE LA REACTION 2.1. Compléter le tableau : Tube n° 1 2 3 4 5 1/[S]i en mmol.L-1 (*) 10 7,14 5 2,5 1,25 Absorbance (A) à 405 nm 1/Vi en µmol-1.L.min (**) * : les concentrations en substrat sont prises au début de la réaction enzymatique (mélange réactionnel avant addition de la solution d’arrêt). ** : 1/Vi = 6.10-6./A avec  en mol-1.L.cm 2.2. Tracer, sur papier millimétré, la courbe : 1/ Vi = f(1/[Si]). 2.3. Déterminer les constantes cinétiques, KM et Vmax, de la réaction