Constante de Michaelis

[modifier] Purine Nucleoside Phosphorylase La vitesse de réaction enzymatique est mesurée à partir de la quantité de produit formé ou de réactif disparu par unité de temps. L'affinité de l'enzyme pour son substrat est donnée par son Km ou constante de Michaelis dans le cas d'une enzyme simple, à un seul site de fixation (enzyme dite michaélienne). Celle-ci est définie comme la concentration de substrat pour laquelle la vitesse de réaction enzymatique est la moitié de la vitesse de réaction maximale

peut lier le même nombre de molécules de chloramphénicol et avec la même affinité. Compartiment A Compartiment B 10000 5560 16700 9970 25797 16697 38205 26905 58500 45000 a. Effectuer une représentation de Scatchard. b. Déterminer la constante d’association KA du complexe ribosome chloramphénicol. c. Calculer le nombre n de sites récepteurs d’un ribosome pour le chloramphénicol. On donne : 1μCi = 2,2 106 cpm Claudius El ZeinClaudius El Zein4 Enzymes michaéliennes 1er Exercice:

les courbes obtenues, on peut voir que la DO augmente au cours du temps, et de façon linéaire pendant environ 1min. Ce qui signifie que la quantité de produit dans le milieu augmente.  http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/8/87/Michaelis-Menten.png De plus, on remarque que plus la concentration en substrat est grande (croissante de A à G), plus la pente de la courbe, dans les temps initiaux, est importante. Ainsi, la vitesse d’apparition du produit dans le milieu, augmente avec

à 405 nm. Calculs préalables à faire lors de la séance : -calculer pour chaque tube la température en Kelvin. -Déterminer pourquoi tracer la courbe ln(v0) =f(1/T) permettra de déterminer l’énergie d’activation Ea 4 – Détermination des constantes cinétiques – partie expérimentale Préparez 8 tubes selon les indications suivantes : Tubes 1 2 3 4 5 6 7 8 Substrat (en mL) 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30 0,40 0 Tampon (en mL) citrate- phosphate de sodium pH 4

est donc nécessaire de linéariser cette courbe pour obtenir les représentations de Lineweaver Burke et de Hanes Woolf pour diminuer les incertitudes et obtenir des valeurs plus précises 2. Détermination de la vitesse maximale et de la constante de Michaelis. Cinétique de réaction suit l’équation de Mickaelis-Menten : V= f([PNPP]) = (Vmax[PNPP])/(Km + [PNPP]). D’après cette équation on peut en déduire l’expression de 1/V = f(1/[PNPP]) 1/V = (Km + [PNPP])/ (Vmax[PNPP]) 1/V = Km/ (Vmax [PNPP])

d[C] 1 d[D] v=− =− = = b dt d dt a dt c dt Si on introduit le degré d’avancement de la réaction ξ, la vitesse se définit par dξ v= dt 2. Loi de vitesse et constante de vitesse : La vitesse d’une réaction est souvent proportionnelle à la concentration des réactifs élevée à une certaine puissance : v = k [A ]α [B]β k est la constante de vitesse, fonction unique de la température α et β sont des entiers ou demi-entiers, α est l’ordre partiel de la réaction par rapport à A, β est l’ordre partiel

d tel que : A d=dnA B d=dnB ………….. i d=dni   Lois de vitesse, constante de vitesse   On pose que la vitesse globale de la réaction est proportionnelle à une certaine puissance de la concentration des réactifs , autrement dit :              , ,  sont appelés ordres partiels de la réaction.  est l’ordre partiel du constituant A.  est l’ordre total de la réaction, k est appelée constante de vitesse.   La constante de vitesse est indépendante des concentrations, et dépend de la température

vitesse de disparition d’un réactif ou de formation d’un produit Établir une loi de vitesse à partir du suivi temporel d’une grandeur physique (TP) Exprimer la loi de vitesse si la réaction chimique admet un ordre et déterminer la valeur de la constante cinétique à une température donnée Déterminer la vitesse de réaction à différentes dates en utilisant une méthode numérique ou graphique Déterminer un ordre de réaction à l’aide de la méthode différentielle ou à l’aide des temps de demi-réaction

Enzymologie et Bioénergétique Année Universitaire 2014 – 2015 Enseignant responsable : Christine Robert-Da Silva          TD  1  -­‐  ENZYMOLOGIE  -­‐  Cinétique     Exercice  1  :  Relation  entre  Δ G’°  et  constante  d’équilibre  K’eq   Soit  5  réactions  de  type    A  ⇔  B   Calculer  les  proportions  de  A  et  B  à  l’équilibre,  sachant  que  les  variations  d’enthalpie  libre  standard  de  ces

directeur augmente donc plus la vitesse initiale augmente. L'équation de Michaelis Menten donne la relation entre la vitesse initiale d'une réaction enzymatique et la concentration en substrat: avec vi la vitesse initiale [S] la concentration en substrat donc en PNPP Vm la vitesse maximale qui peut être atteinte que lorsque la concentration en PNPP est saturante Km la constante de dissociation est proportionnelle à l'affinité entre enzyme et substrat inversement