Constante de Michaelis

d’étalonnage » 9- savoir calculer le coefficient moléculaire e d’une substance dans les conditions expérimentales utilisées (pH, max, etc.) ; distinguer entre coefficient d’extinction moléculaire e d’un composé chimique en solution, qui est une constante, et coefficient directeur a d’une courbe d’étalonnage, qui peut varier avec l’état d’oxydation ou le vieillissement d’un réactif, et qui varie par conséquent dans le temps L’ORTHONITROPHENOL L’orthonitrophénol a pour structure un cycle benzénique

ou ThréonineR-SHCystéineR-COOHAspartate ou glutamateNoyau imidazoleHistidineNoyau phénolTyrosineR-NH2LysineGroupement guanidineArginineTravaux de Michaelis et Menten1913 : travaux sur l’invertaseCinétique enzymatique Mesure de la vitesse initiale (Vi) d’une réaction enzymatiqueEtude de l’influence de la concentration en substrat ViEquation de Michaelis et MentenDémonstrationCas particuliersDéfinition de l’activité enzymatiqueTempérature optimalepH optimalEffecteurs enzymatiquesDémonstration de l’équation

-3 5 / 10 mg/L -6 20 / 10 UI/L ASf = ----------------------- = 100 000 -3 0,2 / 10 mg/L facteur de purification = ASf/ASi = 10000/200 = 500 Le tutorat est gratuit. Toutes reproductions ou vente sont interdites. → Equation de Michaelis et Menten • La vitesse initiale d’une réaction enzymatique est égale à 25 % de la Vmax lorsque la concentration du substrat est de 4 mM. Quelle est la valeur de Km ? Vm [S] V = ---------------Km + [S] V [S] ------ = 25% = ---------------Vm

MODELE DE MICHAELIS 3.1. Généralités 3.1.1. Influence de la concentration en enzyme v v2 v1 E1 E2 [E] Concentrations 3.1.2. Influence de la concentration en substrat a) Variation de [S], [P] et [ES] au cours du temps S P ES 0 tA tB b) Variation de la vitesse en fonction de [S] v VM Enzyme saturé [S] COURBE DE SATURATION Temps 4/22 3.2 . Aspect théorique – Equation de Michaelis v= VM [S ] [S ] + KM 3.3. Signification des paramètres cinétiques 3.3.1 Constante de Michaelis KM ENZYME

quelle manière la concentration ou la quantité des produits de la réaction évolue au cours du temps. On peut en déduire certaines caractéristiques de la réaction : vitesse initiale pour une concentration donnée du substrat, ordre de la réaction, constante de vitesse apparente; par ailleurs cette étude constitue une étape préalable avant d'aborder la détermination de paramètres cinétiques propres à l'enzyme pour un substrat donné : KM, VMax, activité spécifique. 2) Mode opératoire a) Manipulation préliminaire

réactions globales écrites ci-dessous, de telle sorte que chaque réaction globale soit écrite dans le sens thermodynamiquement spontané. Calculer la variation d’énergie libre standard de la réaction considérée dans le sens spontané ainsi que la constante d’équilibre. Donnez les structures des composés simples (penser à équilibrer les équations). a) Pyruvate + −hydroxybutyrate  Lactate + acétoacétate b) Acétoacétate + NADH + H+  -hydroxybutyrate + NAD+ c) FADH2 + 2 cyt b (Fe3+)  FAD + 2 cyt

sec-1 Réactions chimiques élémentaires : A + B  C + D Dans le cas d’une réaction élémentaire, la vitesse de réaction dépend de la vitesse de déplacement des particules (donc de la température) et de leur concentration : V = kt. [A] . [B] kt = constante Réaction A + B (ordre 2) dépend de la vitesse des deux particules et de l’angle auquel les deux vont se rencontrer (choc efficace) 2A  C + D Résulte de la collision de 2 particules A (ordre 2) V = kt . [A]2 A  C + D Résulte de la décomposition

Calculs des Vm et Km d’une activité enzymatique. Etude de l’effet d’un inhibiteur. Ici on va chercher dans un premier temps à calculer l’activité d’une enzyme puis la constante de Michaelis et la vitesse d’une réaction enzymatique. Ensuite on déterminera l’effet d’un inhibiteur sur cette réaction, c’est à dire sa constante et sa nature. Pour cela nous allons tracer la cinétique de la réaction mettant en présence l’enzyme dont on veut calculer l’activité, puis recommencer cette opération avec

interne) dont la variation mesure le bilan énergétique des échanges avec l’extérieur. Variation d’énergie interne : ΔU = Q + W (Kj/mol) W : travail mécanique ; W= -PdV ; P : pression du système Q : Chaleur ou énergie thermique * A pression constante (isobare), la variation d’énergie interne devient : Qp= ΔU + PdV Qp= ΔH ΔH>0 : réaction endothermique (consomme de la chaleur) ΔH<0 : réaction exothermique (dégage de la chaleur) ΔH : variation d’enthalpie Variation d’enthalpie

concentration d'enzyme, de la concentration du substrat, en représentation graphique normale ou en double inverse. Cet objectif peut faire l'objet d'applications numériques (TD, TP). Définir la vitesse initiale, la vitesse maximale, la constante de MICHAELIS. Donner des exemples d'inhibitions de réactions enzymatiques en expliquant les effets de cette inhibition sur les paramètres de la réaction. Donner des exemples d'effets allostériques : activation coopérative et rétroinhibition. Etudier