Incube

Construction du business case Développem ent II Incubé III Start-up Entreprise Lancement du produit Validation IV V VI VII VIII Segmentation des besoins Morocco Innovation Initiative www.mcinet.gov.ma 29 Processus d’innovation : appui et financement Génération de l’idée Porteur d’idée I Identification et Formulation Construction du business case Développem ent II Incubé III Start-up Entreprise Lancement du produit

(KH) * Citrate de Simmon * Suspension bactérienne * Bouillon Clark et Lubs (CL) III-Le milieu Mannitol Mobilité Nitrate Ce milieu contient du rouge de phénol. a-Technique * Ensemencer le rouge de phénol par piqure centrale * Incuber 24h à 37°C b-Lecture -Si le milieu vire au jaune, on en déduit que le mannitol a été utilisé et on a alors mannitol + -Si le milieu reste inchangé, on en déduit que le mannitol n’a pas été utilisé et on a mannitol- IV-Le milieu Kliger Hajna rolland

- Couler 10 à 15 mL de milieu. - Homogénéiser parfaitement. - Laisser solidifier sur une surface froide. - Couler éventuellement 4 mL de gélose blanche stérile (Agar bactériologique type A à 15 g/L). - Laisser solidifier à nouveau. Incuber : - à 30°C pendant 72 heures pour la recherche des microorganismes mésophiles. - à 55°C pour les microorganismes thermophiles. - à 6,5°C pendant 10 jours pour les microorganismes psychrophiles. Lecture: Procéder au comptage

10µl ; une noisette de selle est incorporée dans le bouillon Rappaport. Avant l’ensemencement, l’échantillon de selles est dilué dans de l’eau distillée. Les milieux sont incubés 24 à 48h à 37°C, le milieu Rappaport est incubé 24h à 37°C. Le milieu CAMP est incubé 5 jours à 37°C en atmosphère micro-aérophile, le milieu YER est incubé 24 à 48h à 30°C. La coproculture standard comprend la culture des milieux SS, milieu sélectif des espèces de Salmonella et Shigella, YER (Yersinia CIN), milieu spécifique

bactérie est donc NR + stade Nitrite GRIESS 1 (Nit 1) + GRIESS 2 (Nit 2) Absence de coloration : Absence de nitrites : - soit parce qu’ils ne se sont pas formés - soit parce qu’ils ont été réduit en azote Bouillon nitrate + bactéries Incubé 24 heures à 37 °C Zn Absence de coloration rouge : Disparition des nitrates du milieu et leur transformation en nitrites puis en azote. La bactérie est NR+ stade azote Présence d’une coloration rouge : Le zinc a réduit les nitrates en

Ajouter les éléments comme décrit dans le tableau ci-dessous (les volumes sont en µl). Attention : Garder l'enzyme de restriction sur glace - Utiliser une pointe neuve pour chaque pipetage     Mélanger en pipetant plusieurs fois. Incuber la réaction à 37°C de 30 à 60 minutes. Placer les tubes à 70°C 15 minutes pour inactiver l'enzyme de restriction. 2) Ligation   Prendre 2 nouveaux tubes marqués L (pour ligation) et C (pour control). Ajouter les éléments comme décrit dans

par rotation. Filtrer le contenu du flacon à travers un filtre 0.45µm. Déposer le filtre à la surface d’une gélose nutritive. Incuber à 37°C pendant 42h. Vérifier l’absence de colonie sur le filtre pour un contrôle positif. Méthodes 02  Emploi d’un bouillon nutritif TSB Mode opératoire : verser 10ml de bouillon TSB dans chaque flacon à contrôler. Incuber l’un a 22° et l’autre à 37°. Interprétation et action correctives : S’il y a présence de trouble le contrôle est positif (refaire

centrifugeuse - tubes à centrifuger (2/binôme) - flacons pour la congélation - bicarbonate de sodium à 0,1M (préparation : 8,4 g dans 1L eau distillée) 2 - Mode opératoire - Suspendre 10g de levure de boulangerie dans 40 ml de bicarbonate de sodium à 0,1M - Incuber à 35-40°C pendant 24H - Centrifuger à 5000 tr/min pendant 5 min - Après centrifugation, récupérer le surnageant contenant les molécules solubles entre autres l’invertase. - Jeter le culot formé de débris cellulaire - Noter le volume total de surnageant

Lycée J.Moulin Pézenas – janvier 2003 Atelier scientifique OGM D’après Biotechnology explorer – pGLO bacterial transformation kit 6. Incuber les tubes 10 minutes dans la glace. 6 7. Choc thermique. Transférer rapidement les tubes +pGLO et -pGLO de la glace vers le bain marie 42 °C, exactement 50 secondes. Replacer rapidement les tubes dans la glace. Incuber les tubes 2 minutes dans la glace. 7 Vérification des résultats de la transformation Les contenus des tubes de transformation et

Conclusion Les environnement extrêmes constituent un réservoir encore mal connu de biodiversité microbienne. Les souches isolées ont des potentialités élevées pour une utilisation en biotechnologie. L’étude de ces écosystèmes contribue très significative- ment à la compréhension des phénomènes à l ’origine de la vie sur terre.Matériel utilisés Boites de pétri contenant le milieu gélose nutritive Tubes à essayecontenet Micropipette de 1 ml Embouts bleus et jaunes stériles Pipettes Pasteur (râteau)