Incube

RNase A (100mg/ml) (RNase est déjà ajoutée dans le tampon AP1). NE PAS JETER LES PISTONS !!!! A rendre impérativement à l’enseignant. 2. Lyse des cellules : incuber le mélange 10min à 65°C. Mélanger 2-3 fois en inversant le tube. 3. Précipitation des protéines et des polysacharides : ajouter au lysat 130µl de tampon AP2, mélanger puis incuber 5min sur glace. 4. Centrifuger 5min à vitesse maximale. 5. Déposer le lysat sans entrainer le culot de débris cellulaires dans la colonne QIA (couleur lilas)

notation (Attention à n’utiliser que des volumes que l’on peut pipeter). 2. Préparation des milieux réactionnels Incuber à 37°C la solution de phosphatase alcaline (3 mL fourni par l’enseignant) qui vous servira à réaliser les cinétiques. Préparer 8 tubes à hémolyse (S1-S8) contenant : • 1,5 mL de tampon Tris-HCl pH 8,3 • 0,5 mL de ZnCl2 0,6 mM • 1 mL d'eau distillée Incuber le milieu réactionnel à 37°C (au moins 5 minutes, les laisser dans le bain-marie). Puis ajouter dans le tube S1 •

de viande ont été contaminés avec 1,5*10^4 bactéries/ml. 3 autres morceaux de viande ont été contaminés avec un inoculum à 0,5 MacFarland (3,0*10^8 bactéries/ml ). Ce seront les témoins des différentes températures étudiées. Ces morceaux ont été incubés à différentes températures (-18°C, 4°C, 18°C) pendant 17h. Aujourd'hui vous allez devoir : Passer les morceaux de viande au stomacher, cette méthode va permettre de broyer les morceaux de viande afin d'avoir un rendu liquide, cela va également diluer

sont capables peuvent produire H2S, qui sera révélé par le citrate ferrique. Si la bactérie ensemencée produit H2S, en présence du fer III, un précipité noir se forme au centre de la colonie. Ensemencement Isolement par la méthode des cadrans. Incuber 18 à 24 h à 37°C. Lecture · colonies rouges : lactose + · colonies incolores : lactose – · colonies à centre noir : H2S + | ........................................................................................................ GELOSE

dans le milieu LB stérile Travaux Pratiques de Microbiologie Générale MGG, LSV2 3 jusqu'à la dilution 10-7. (Voir démonstration). 3) Etaler stérilement 100 μL des dilutions 10-5, 10-6, 10-7 sur boîte de milieu LB. 4) Mettre les boîtes à incuber à 37°C pendant 24 heures, en position inversée (couvercle en bas) pour empêcher l'eau de condensation du couvercle de couler sur le milieu gélosé. Résultats J+1 (lecture au TP2) Dénombrer les colonies bactériennes et en déduire le titre de votre

échantillons liquides peu chargés sont filtrés sur une ou plusieurs membranes de 0,45 µm pour concentrer les bactéries. Les membranes sont déposées dans le bouillon TSB. Enrichissement non sélectif Le bouillon d’enrichissement non sélectif TSB est incubé pendant 24 h à 36 °C. L’enrichissement permet la croissance et la multiplication de toutes les bactéries capables de croître dans le bouillon TSB. Sélection Six gouttes du milieu d’enrichissement non sélectif sont déposées sur la gélose semi-solide

30°C) mais pas à 4°C La galerie traditionnelle d’identification se composera donc : MILIEU ENSEMENCE VF 2 x HL + glucose CARACTERES DE GROUPE DE GENRE MMN ou Bouillon Nitraté Gélose Nutritive milieux KING A et KING B bouillon nutritif incubé à 42°C bouillon nutritif incubé à 4°C CARACTERES D’ESPECE VF Nitratée ou MMN milieu de Falkow + Arginine milieu Citrate de Simmons Test au film photographique CARACTERE RECHERCHE Type respiratoire Voie d’attaque du glucose Nitrate réductase (Mannitol + Mobilité)

- Dans un tube à hémolyse, introduire quelques gouttes de sérum humain ; - Prélever une colonie de levures sur la boite de pétri à l’aide de l’anse de platine stérilisée et l’introduire dans le tube ; - Homogénéiser le mélange au vortex ; - Incuber à 37°c pendant 3h ; -Réaliser un état frais entre Lame et lamelle et observer à l’objectif x40. Résultat : Si la levure a filamenté alors conclure qu’il s’agit de Candida albicans. Si la levure n’a

(p/vol) 125 mM 4% 1% 20% 0,05% pour 10 ml 1,25 ml de 1 M 2 ml de 20% 100 µl 2 ml 50 mg PROTOCOLE  Ensemencer les souches de levure dans des tubes de culture contenant 3 ml de milieu approprié (sélectif non inducteur dans le cas étudié ici). Incuber pendant la nuit à 30°C avec agitation. Mesurer la DO600nm d'une dilution au 1/10 des cultures de la nuit. Centrifuger un volume correspondant à un total de 10 unités de DO600nm de chaque culture pendant 5 min à 4 000 t/min. Resuspendre le culot dans

(ml)0.50.50.50.50.50.5Solution Tampon « T » (ml)0.50.50.50.50.50.5Eau distillée (ml)0.50.60.70.80.90.95Mettre ce mélange au Bain Marie pendant 2 min.Extrait enzymatique (ml) ** 0.50.40.30.20.10.051- Incuber au Bain Marie à 37°C.2- Préparer la plaque à lugol (150μl de lugol par puits). 3- Prélever à chaque minute 150μl du milieu réactionnel et les rajouter au 150μl de lugol de la plaque - le temps zéro correspond au temps avant