Chromatographie Sur Colonne

l’activité enzymatique ............................................................................ 2 II. 3. Purification par résine Sépharose 4B ............................................................................. 3 II. 4. Dosage par chromatographie en phase liquide à haute performance (H.P.L.C.) .......... 4 II. 5. Budget ............................................................................................................................ 4 III. Résultats ......................

conteneurs comprenant le substrat avec de l’aluminium pour limiter l’incertitude dans les résultats. De plus, on quantifie le nombre d’anticorps dans quatre fractions numérotées de F1 à F4 qui sont issues de la purification du sérum immunisé par chromatographie d’affinité. Chaque fraction est diluée en double au 1/10000puis au 1/20000. Comme on l’a dit auparavant, on effectue plusieurs lavages afin d’éliminer les protéines qui ne se sont pas fixées. Pour cela, on prépare un détergent non ionique

Mikhaïl Tsweet Mikhaïl Semionovitch Tsweet (1872-1919) est un botaniste russe qui a inventé la chromatographie d'adsorption. Son nom signifie “couleur” en russe. Mikhail Semenovich Tswett est né de l'union d'un fonctionnaire russe et d'une mère italienne à Asti, en Italie, le 14 mai 1872. À la mort de sa mère, peu de temps après sa naissance, il sera élevé à Genève où il obtiendra son Bachelor of Sciences en 1893, dans le département de physique et de mathématiques de l'université de Genève. C'est

TP CPG BSF – L3 Biochimie 1 CPG La Chromatographie en Phase Gazeuse (CPG) est une technique de séparation des molécules d’un mélange. Il s’agit d’une chromatographie de partage gaz-liquide. Le critère de séparation est l’affinité respective des molécules à séparer avec les phases stationnaire et mobile. Les composés doivent être volatils pour être séparés, on va donc dériver les produits de l’hydrolyse afin qu’ils soient volatils. La phase mobile est un gaz de faible viscosité qui entraîne

leur égard sont condensées dans le tableau. (57) Tableau II.1 : Incidence des propriétés physicochimiques des huiles essentielles sur leurs utilisations (57)  Propriété Conséquences Qualité inconstante Contrôle chimique : chromatographie en phase gazeuse et chromatogramme Oxydabilité Conservation limitée : 2 ans maximum à l’abri de l’air et de la lumière (flacon coloré) dans un endroit frais(maximum 20°c) Toxicité Dosage précis irritation possible des muqueuses Activité antibactérienne

ADN et protéines et ensuite traité au sulfate de protamine afin de précipiter l’ADN. Après centrifugation, le dernier surnageant est chargé sur une colonne de Glutathion Sepharose ®4B pour exécuter une chromatographie d’affinité. III.1-Chromatographie d’affinité sur colonne de Glutathion-Sépharose Le principe de séparation de cette chromatographie d’affinité repose sur l’interaction entre un effecteur immobilisé sur la phase stationnaire et le composé à purifier présent dans la phase mobile.

pour purifier la protéine à partir du blanc d'œuf par chromatographie d'échange d'ions. A titre indicatif les principales protéines contenues dans le blanc d'œuf et leurs caractéristiques sont indiquées dans le tableau ci-dessous : MM (Da) pHi % conalbumine 87 000 6,8 14 ovalbumine 43 000 4,6 65 ovomucoïde 28 000 4 9 lysozyme 14 000 11 3 I- CHROMATOGRAPHIE D'ECHANGE D'IONS 1) Matériel et produits - colonne à chromatographier 1 x 10 cm - pipettes automatiques de 20, 200 µL, 1 mL

et enlever le surplus d'extraits d'évaporation ou distiller le CHCL3 jusqu'à obtenir un volume inferieur a 25ml. Et procéder comme ds le 920.103 1ml 0,1 N d'H2SO4 = 4,85 mg de caféine anhydre. Methodes de spectrophotométrie ultra violet et chromatographie gazeuse. A Réctifs (a)-Solution standard de cafeine : solution num 1 : 500µg/ml. Peser précisement 100 mg de cafeine, USP ; la dissoudre et diluer ds une fiole jaugée de 200 ml et avec du CHCL3 -Solution num 2 : 10µg /ml. Pipeter 20

inversement). Ce tétramère est composé de deux types de sous-unités différents M et H, et pouvant s'associer en cinq isoenzymes différentes. Le but de ce TP est de purifier la LDH, ici de façon partielle, au moyen d'une chromatographie d'affinité en colonne. Le principe de la chromatographie d'affinité repose sur la complémentarité d'une protéine pour un ligand fixé sur un support macromoléculaire insoluble. On cherche à isoler une protéine présente dans un mélange. La protéine que l'on cherche à purifier

BIOCHIMIE EXPERIMENTALE 1 EXTRACTION DE L’ALBUMINE DU SERUM PAR CHROMATOGRAPHIE D’AFFINITE BUT Le but de ce TP sera d’extraire l’albumine d’un sérum en utilisant une chromatographie d’affinité, de déterminer la concentration d’albumine dans le sérum, puis de vérifier, à l’aide d’une électrophorèse, que la chromatographie a correctement fonctionné. PRINCIPE Chromatographie d’affinité sur Bleu Sepharose CL-6B La chromatographie d’affinité se fait avec une résine sur laquelle nous avons fixé