Géloses

micro-organismes : - apport de la source d'énergie, de carbone, d'azote; - besoins en ions minéraux, en facteurs de croissance; - pH et force ionique voisins des valeurs optimum. Il peut se présenter sous forme liquide ou solide, par addition : d'aqar ou gélose (intérêt : fusion au delà de 80°C, mais possibilité de le maintenir en surfusion à 45°C, température compatible avec l'incorporation de micro-organismes ; pas d'hydrolyse de l'agar par les µ-org), C'est un polymère sulfaté composé de D- et L-galactose

à la lumière: transparente Couleur: jaune On observe que le milieu est devenu jaune, il y a donc acidification du milieu due à la fermentation du mannitol, les bactéries fermentent donc le mannitol, elles sont donc mannitol+. Gélose à l'ADN La gélose à l'ADN est un milieu solide qui permet la recherche de la désoxyribonucléase, en particulier celle des staphylocoques. Cette enzyme hydrolyse l'ADN en nucléotides. Pour la lecture, on inondera le milieu avec une solution d' HCl. On peut

n°2 en gélose inclinée. Milieux Gelosés pour l’isolement des streptocoques. Matériel et methode * Couler en boite de pétri : *un milieu KF : -> faire fondre 2 tubes de milieu au Bain-marie à 100°C puis laisser refroidir vers 55°C. -> Ajouter 2 gouttes de TTC à1% à la pipette pasteur déboutonnée (0,1mL) -> Mélanger et couler en boite de Pétri. * un milieu de Slanetz et Bartley (2 boites de Pétri) * une gélose à la bile

les limites sont bien respectées. C’est le calcul suivant qui nous permettra donc d’obtenir les bonnes dilutions pour avoir des boites de pétri lisibles : 2. Les micro-organismes aérobies 30°C En ce qui concerne le milieu PCA, il s’agit d’une gélose glucosée à l'extrait de levure favorisant la croissance de la plupart des bactéries à dénombrer. Ce milieu est très peu sélectif cependant, les bactéries caséolytiques forment un halo plus clair autour de chaque colonie (protéolyse de la caséine

utilisées pour caractériser une bactérie 2.2. LA SENSIBILITE AUX ANTIBIOTIQUES 2.2.1. L’antibiogramme et la détermination de la CMI Il existe deux méthodes : 1. Méthodes par diffusion en gélose 2. Méthodes par dilution en milieu liquide 1. La méthode de diffusion dans la gélose La méthode de diffusion dans la gélose (agar) est particulièrement adaptée à l'étude de l'action des antibiotiques sur la croissance des bactéries. Elle permet de déterminer leurs antibiogrammes, qui rendent compte de la sensibilité

au 1/10ème. Ensuite vous allez devoir ensemencer deux boîtes gélose PCA à partir de la solution stomachée. A partir de la solution stomachée, vous allez devoir effectuer une série de dilution en cascade jusqu'à 10^-3. Enfin avec ces dilutions vous ensemencerez six boîtes gélose lactosée au désoxycholate. - Dénombrement en surface de la flore totale ( 2 boites ) : A partir de la solution stomachée, réaliser deux ensemencements sur gélose PCA, ces ensemencements permettront de dénombrer la flore totale

recherche: - Principalement, de la présence ou l’absence d’enzyme (oxydas, uréase…) - Accessoirement, par la mise en évidence de catabolites (acétoine) II- Exploration du métabolisme respiratoire 1- Etude du type respiratoire: - Ensemencer, sur une gélose viande foie (VF) préalablement régénérer au bain marie bouillant pendant 20 min puis refroidi, une quantité de la suspension bactérienne à étudier soit: à l’aide d’une pipette pasteur stérile de bas en haut et en spirale. - En déposant à la surface

en culture sur une gélose nutritive. Matériel • Matériel de stérilisation (four, autoclave ou autocuiseur). • Etuve ou enceinte thermostatée 37°C +/- 1°C. • Matériel de microbiologie : boites de pétri stériles petit diamètre, pipettes 1 mL stériles (usage unique), flacons stériles. • Système de filtration sur membrane et membranes stériles, trompe à vide. • Gélose au Tergitol 7. Protocole • Travail préparatoire o Préparation de la gélose et conservation.

90 Rage 200 99 Fièvre jaune 1/million de voyageurs 99 B) Les Différents Moyens De Contamination Principes de la manipulation : La gélose contient tous les nutriments nécessaires au développement des bactéries. On met en contact les milieux/objets avec la gélose, et les bactéries se déposent sur la gélose et se développent. La température dans le milieu où va se développé les bactéries doit être inférieur a 6°c. Les milieux testés sont au nombre de 6 : 1. de l'eau

existe une émergence des résistances acquises, notamment vis à vis la ciprofloxacine, la colistine (>10%) et le Carbapénème d’ou l’importance de la réalisation d’un antibiogramme. Une gélose de Mueller Hinton est recouverte avec la suspension bactérienne, les 6 disques d’antibiotiques sont ensuite déposés. Enfin, la gélose est mise à l’étuve pendant 24h à 37°C. 2.3- Jour 3 : Résultats de l’API 20 E : Résultats de l’antibiogramme : Antibiotique   Ampicilline   Amoxicilline+  acide   clavulanique