Peroxydase

couplé à une enzyme: la péroxydase. Troisième étape: on verse l’anticorps de détection. Il est couplé à une enzyme: la péroxydase. Les anticorps de détection se fixent aux anticorps antiBSA. Les anticorps de détection se fixent aux anticorps antiBSA. Le puits est vidé et lavé deux fois avec le tampon twin Le puits est vidé et lavé deux fois avec le tampon twin Quatrième étape: On verse dans le puits la solution révélatrice contenant le substrat de la péroxydase: le TMB ( tétra-méthylbenzidine)

fluorescent (Fluorescéine, Rhodamine, Rouge Texas….). Intérêt : permet facilement les doubles marquages et évite les problèmes liés aux peroxydases endogènes. Le marquage est labile dans le temps : des milieux de montages spéciaux permettent d'éliminer l'effacement du marquage. Pour la révélation de l’immunohistochimie indirecte, les enzymes utilisées sont la peroxydase ou la phosphatase alcaline et les chromogènes sont le plus souvent la diaminobenzidine (réaction de couleur brune) ou l'aminoethylcarbazole

TP3 : PHOTORESPIRATION Introduction : Lors de cette séance de travaux pratiques nous allons traiter de la photosynthèse et plus particulièrement des enzymes catalase et peroxydase qui interviennent dans ce processus. Nos études se feront à l’aide de deux types des plantes utilisant des mécanismes différents (les plantes en C3 et en C4). Durant la photosynthèse la plante produit de l’eau oxygénée (H2O2) qui peut être nocif pour elle, c’est pourquoi elle fixe le CO2. Nous comparerons donc les mécanismes

oxydant au contact du sang fut observée pour la première fois par Albrecht en 1928. Les principaux composés pouvant catalyser cette réaction d'émission de lumière sont les métaux de transition, l'hème et la peroxydase. L'hème est une structure biochimique qui fait partie intégrante de la peroxydase. Cette structure est également présente dans l'hémoglobine. Ainsi, la présence d'hémoglobine, donc de sang, peut être mise en évidence en exploitant l'aptitude de l'hème à catalyser la chimiluminescence

chaines légères d'anticorps de rat. Ces anticorps sont marqués à la peroxydase ce qui permettra de visualiser le complexe MAR(K1+L15)-PO--IgG1. Le TMB correspond au substrat de la peroxydase qui le transformera en un produit coloré quantifiable en DO. L'intensité de coloration est directement proportionnelle à la quantité d'antigène. Enfin l'ajout d'acide sulfurique permet l'arrêt de la réaction colorimétrique catalysée par la peroxydase. La solution devient alors jaune selon la même intensité. Nous lirons

au microscope confocal. La technique de FISH (ou Fluorescent In Situ Hybridization) consiste à utiliser des sondes complémentaires des différents chromosomes et à les visualiser à l’aide d’anticorps fluorescents. — soit une enzyme (comme la peroxydase du raifort ou la phosphatase alcaline) que l’on fait agir sur son substrat ; le produit de la réaction enzymatique est révélé par un chromogène (comme la diaminobenzidine par exemple) qui le colore (en brun, en rose ou de toute autre couleur)

1 – PROPRIETES ET STRUCTURE 2.2.2 – MECANISME D’ACTION 2.2.3 – PRINCIPALES FLAVOPROTEINES MEMBRANAIRES 2.3 - LES COENZYMES QUINONIQUES : UBIQUINONE ET PLASTOQUINON²E 2.4 - LES METALLOPORPHYRINES : CYTOCHROMES ET PEROXYDASES 2.4.1 - CYTOCHROMES 2.4.2 – CATALASES ET PEROXYDASES 2.4.3 - OXYGENASES 2.5 - PROTEINES FER-SOUFRE 3 - LES COENZYMES DE TRANSPORT DES RADICAUX MONOCARBONES 3.1 - COENZYME DE TRANSPORT DE CO2 3.1.1 – BIOTINE OU VITAMINE H 3.1.2 – VITAMINE K (pour mémoire) 3.2 - COENZYMES

est enlevé par le TBS tween. Grâce à cette méthode, les protéines seront révélées spécifiquement par l’action d’un anticorps. On utilisera ici une solution d’anticorps anti-lysozyme couplés à une peroxydase : l’anticorps se liant spécifiquement au lysozyme. La révélation se fera par l’ajout à la peroxydase d’un substrat incolore dont le produit apparait coloré permettant ainsi la révélation de la protéine d’intérêt : le lysozyme. III) Résultats et interprétation A°) Electrophorèse sur gel de polyacrylamide

plaquettes : La numération plaquettaire est effectuée de la même façon que celle des globules rouges. Un problème peut se rencontrer chez certains patients : la formation, en tube, d'agrégats plaquettaires. Ceux-ci seront décelés au niveau du diagramme peroxydase sous la forme d'une population surajoutée, qui alertera le Biologiste, quel que soit le chiffre des plaquettes comptées. 5.5.3) Les leucocytes : Comme pour les lignées rouges et plaquettaires, la numération et la formule sont établies sur un

glucose-oxydase produit de l’eau oxygéné H2O2 et de l’acide gluconique. Si on rajoute comme réactif un chromogène réduit incolore, l’eau oxygéné en présence de peroxydase oxyde à son tour ce chromogène en un dérivé oxydé coloré. Dans notre cas, le chromogène se colore en rose. On utilise donc le réactif Glycemag car il contient la glucose oxydase, la peroxydase et le chromogène réduit incolore. On va donc introduire la même quantité de réactif dans des tubes de concentration en glucose afin d’obtenir une gamme